学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

抗猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体制备及鉴定

作　者: 何建辉
导　师: 刘湘涛
学　校: 中国农业科学院
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白 杂交瘤技术 单克隆抗体 病毒中和实验
分类号: S852.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 95次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


本研究应用细胞融合方法,以基因重组表达的猪繁殖与呼吸综合征病毒的主要结构蛋白GP5免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合。经多次细胞克隆及间接ELISA筛选,获得两株能稳定分泌抗PRRSV及一株抗重组谷胱甘肽转移酶(GST)抗体的杂交瘤细胞株,并对其特性作了鉴定。经单克隆抗体亚类分型鉴定,三株单克隆抗体依次为IgG1、IgG2a和IgG2a。所筛选的杂交瘤细胞株的染色体计数均在杂交瘤细胞染色体范围之内。采用ELISA方法对腹水和细胞上清液中单抗效价进行了测定,三株单抗的小鼠腹水中单抗效价≧1:105,杂交瘤细胞上清中效价≧1:104。用叠加实验结果表明所筛选的两株单抗的叠加率为86.2%,由此证明他们针对两个不同的表位。SDS-PAGE电泳结果显示,所筛选的单抗重链分子量为45kD左右,轻链分子量为25kD左右。特异性实验证明3株单抗均有很好的特异性,均不与猪瘟和猪圆环病发生交叉反应。病毒中和试验结果表明所纯化的两株单抗,只有4B4有中和PRRSV的能力,效价达1:256,当该抗体稀释到1:512时其中和能力为可疑,1:1024时无中和能力。而8C9基本上没有中和活性,在接毒36 h后均出现明显的CPE,其最低稀释倍数(1:2)时出现CPE的程度与病毒对照没有差别。

全文目录


摘要  5-6
Abstract  6-11
第一章 文献综述  11-24
  1.1 PRRSV 研究概述  11-16
    1.1.1 病原特性  11-12
    1.1.2 PRRS 流行病学及危害  12-13
    1.1.3 临床症状  13
    1.1.4 PRRSV 致病机理  13-14
    1.1.5 PRRSV 的基因组与结构蛋白  14-16
  1.2 猪繁殖与呼吸综合征的诊断方法  16-19
    1.2.1 临床诊断  16-17
    1.2.2 实验室诊断  17
    1.2.3 血清学检测  17-18
    1.2.4 分子生物学诊断  18-19
  1.3 PRRSV 单克隆抗体的研究进展及应用  19-24
    1.3.1 单克隆抗体概述  19-20
    1.3.2 针对 PRRSV 单克隆抗体的研究进展  20-22
    1.3.3 针对GP5 蛋白的单克隆抗体在PRRSV 中的应用  22-24
第二章 研究报告  24-41
  2.1 材料  24-26
    2.1.1 免疫抗原、细胞株及实验动物  24-25
    2.1.2 主要试剂  25
    2.1.3 主要仪器设备及耗材  25
    2.1.4 免疫学试剂  25-26
  2.2 方法  26-33
    2.2.1 动物免疫及ELISA 筛选方法的建立  26-27
    2.2.2 杂交瘤细胞株的建立  27-29
    2.2.3 杂交瘤细胞的扩大培养及冻存  29
    2.2.4 腹水的制备  29
    2.2.5 腹水的纯化  29
    2.2.6 单克隆抗体的特性鉴定  29-30
    2.2.7 单克隆抗体的亚类分型鉴定  30
    2.2.8 杂交瘤细胞的染色体鉴定  30
    2.2.9 单克隆抗体的稳定性测定  30-31
    2.2.10 腹水连续传代试验  31
    2.2.11 单克隆抗体的特异性  31
    2.2.12 单克隆抗体的位点分析  31-32
    2.2.13 单克隆抗体的SDS-PAGE 电泳  32
    2.2.14 PRRSV 的培养  32
    2.2.15 PRRSV 半数细胞感染剂量（TCID50）的测定  32
    2.2.16 8C9 及 4B4 单抗中和 PRRSV 实验  32-33
  2.3 结果  33-39
    2.3.1 纯化抗原的蛋白含量测定  33
    2.3.2 最佳抗原包被浓度和最佳血清稀释度的确定  33
    2.3.3 免疫小鼠抗体效价的检测  33-34
    2.3.4 杂交瘤细胞株的建立  34
    2.3.5 细胞上清和腹水效价的测定  34-35
    2.3.6 单克隆抗体的纯化  35
    2.3.7 单克隆抗体的初步鉴定  35-38
    2.3.8 8C9 及 4B4 单抗中和 PRRSV 的能力  38-39
  2.4 讨论  39-40
    2.4.1 制备抗原的重要性  39
    2.4.2 免疫动物  39
    2.4.3 细胞融合  39
    2.4.4 检测方法的建立  39-40
    2.4.5 腹水的制备  40
    2.4.6 染色体分析  40
    2.4.7 病毒中和实验结果  40
  2.5 小结  40-41
第三章 结论  41-42
参考文献  42-48
致谢  48-49
作者简介  49

相似论文

  1. 抗吡虫啉—甲基对硫磷双特异性单克隆抗体的研究,S482.2
  2. 甲型流感病毒M2蛋白的表达、纯化及其免疫原性的研究,R392
  3. STLV-1病毒间接ELISA方法建立及杂交瘤细胞株的筛选,R373
  4. PRRSV的感染差异性和抗体依赖性增强作用研究,S858.28
  5. 鸭源鸡杆菌抗体消长规律研究及抗脂多糖单抗杂交瘤细胞株的建立,S858.32
  6. 稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立,R392
  7. 传染性法氏囊病病毒VP2基因的表达与单克隆抗体的制备,S852.65
  8. 猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的制备与鉴定,S852.65
  9. 抗噻菌灵单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立,S482.2
  10. 氯噻啉酶联免疫吸附分析方法研究,S482.3
  11. 华东地区鸭圆环病毒感染流行病学调查及其单克隆抗体的制备,S858.32
  12. 猪TNF-α单克隆抗体制备与PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞TNF-α变化规律研究,S858.28
  13. H9亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备及其AC-ELISA检测方法的建立,S855.3
  14. 日本血吸虫重组蛋白rSjGST的表达纯化及单克隆抗体的制备和特性鉴定,R392
  15. 芜湖地区猪“高热病”流行病学调查与防控,S858.28
  16. 三聚氰胺单克隆抗体制备及间接竞争ELISA方法的初步建立,S859.84
  17. 猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞受体CD163、Sn的克隆及功能鉴定,S858.28
  18. 人TLT-2基因转染细胞株的构建及其单克隆抗体的研制,R392
  19. 乙型脑炎病毒单克隆抗体的制备与初步应用,R392
  20. 鼠抗人PD-L1功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的研究,R392
  21. 鼠抗人PD-L2单克隆抗体的制备及人可溶性PD-L2ELISA试剂盒的研制,R392

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 血清学
© 2012 www.xueweilunwen.com