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穿心莲内酯对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株增殖和抑制影响的实验研究

作　者: 涂玉绮
导　师: 唐维平
学　校:
专　业: 口腔临床医学
关键词: 穿心莲内酯人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞 MTT法细胞周期 RT-PCR
分类号: R739.86
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

研究的背景和目的：目前舌鳞状细胞癌在口腔癌中的发病率最高[1,2]，不断寻找新的安全有效的抗肿瘤药物具有重要的意义，近年来中草药中的抗肿瘤药物成为了研究的热点[3,4]。穿心莲(Andrographis paniculate Ness)是一种爵科植物，现已有许多国家在研究使用[5-7]。研究发现穿心莲中的穿心莲内酯（Andrographolide，AD）不但有抗炎、抗菌、抗病毒作用，还有较强的抗肿瘤作用[8-12]。目前AD还未用于舌鳞癌的研究，做此研究有积极的现实意义。本研究目的在于检测AD对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖、细胞周期和BaxmRNA、Bcl-2mRNA表达的影响，从凋亡基因Bax、Bcl-2mRNA的表达情况来探讨AD可能的作用机制，为AD可能成为临床上治疗舌鳞癌的新药物提供了一定依据。研究内容和方法：1.人舌鳞癌Tca8113细胞在常规条件下培养，取对数生长期的细胞用于实验。2.分别加入浓度为0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml的AD作用于Tca8113细胞，分别继续培养24h和48h后，用MTT法检测AD对细胞生长增殖的抑制作用。3.分别加入浓度为0μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的AD作用于Tca8113细胞，分别继续培养24h和48h后，用流式细胞仪分析AD对细胞周期的影响。4.分别加入浓度为0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的AD作用于Tca8113细胞，继续培养24h后，用RT-PCR法检测AD对人舌鳞癌Tca8113细胞Bax、Bcl-2mRNA表达的影响。结果：1.MTT结果显示，AD作用Tca8113细胞后，能够显著地抑制细胞的增殖；分别加入浓度为0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml的AD作用Tca8113细胞24h后，细胞的抑制率分别为（0±0）%，（2.37±0.19）%，（11.34±1.01）%，（36.65±1.99)%，（49.61±3.34）%，（72.11±5.01）%；AD作用Tca8113细胞48h后，细胞的抑制率分别为（0±0）%，（11.37±1.01）%，（27.43±1.93）%，（46.08±3.28）%，（65.59±6.33）%，（79.47±7.33）%。Tca8113细胞在AD作用相同的时间里，随着实验剂量范围内AD浓度的增加，细胞的抑制率逐渐升高(P<0.05）；而同一AD浓度组的细胞被AD作用48h的抑制率比作用24h的抑制率高（P<0.05），具有明显的剂量-时间依赖性。利用SPSS软件计算出舌鳞癌细胞被AD作用24h后的IC50值为74.66μg/ml。2.流式细胞术(FCM)结果显示，浓度分别为0μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的AD作用于Tca8113细胞24h后，细胞周期中的G0/G1期细胞比例分别为（39.45±0.56）%，（49.10±0.81）%，（56.61±0.64）%，S期细胞比例分别为（56.55±0.53）%，（46.57±0.60）%，（36.86±0.73）%。不同浓度的AD作用Tca8113细胞48h后，细胞周期中的G0/G1期细胞比例分别为（40.16±1.03）%，（57.34±0.65）%，（63.70±0.65）%，S期细胞比例分别为（58.31±0.75）%，（37.23±0.76）%，（32.28±0.54）%。Tca8113细胞在AD作用相同的时间内，随着AD浓度的增加，G0/G1期细胞分布比例升高（P<0.01），S期的细胞降低（P<0.01）；细胞在相同浓度AD的作用下，随着作用时间延长，G0/G1期的细胞分布比例升高（P<0.01），而S期的细胞分布比例降低（P≤0.01）；对照组（0μg/ml）细胞在培养24h与48h后，舌鳞癌细胞周期的分布变化不大，（P>0.05）。3.RT-PCR检测结果显示，AD浓度分别为0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml作用于Tca8113细胞24h后，BaxmRNA的表达量分别为0.383±0.013，0.513±0.021，0.631±0.036，0.733±0.042，0.916±0.048；Bcl-2mRNA的表达量分别为1.137±0.016，0.913±0.025，0.570±0.030，0.403±0.032，0.333±0.025。AD能够促进细胞中BaxmRNA表达，抑制Bcl-2mRNA表达（P<0.05），并具有剂量依赖性。结论：穿心莲内酯（AD)对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖有明显的抑制作用，能够显著的阻滞细胞周期于G0/G1期，并且能促进细胞株BaxmRNA表达和抑制Bcl-2mRNA表达，从而诱导细胞凋亡，为AD可能成为临床上治疗舌鳞癌的新药物提供了一定的实验依据。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-10
中英文缩略词表  10-11
第1章引言  11-13
第2章材料和方法  13-23
  2.1 实验材料  13-16
    2.1.1 细胞株  13
    2.1.2 主要实验试剂  13-14
    2.1.3 主要仪器设备  14-15
    2.1.4 主要试剂的配制  15-16
  2.2 实验方法  16-23
    2.2.1 实验一 MTT 法检测不同浓度的穿心莲内酯对人舌鳞癌 Tca8113 细胞的增殖抑制作用  16-18
    2.2.2 实验二 FCM 法检测不同浓度的穿心莲内酯对人舌鳞癌 Tca8113 细胞的细胞周期分布的影响  18-19
    2.2.3 实验三 RT-PCR 法检测不同浓度的穿心莲内酯对人舌鳞癌 Tca8113细胞 Bax、Bcl-2mRNA 的表达的影响  19-23
第3章结果  23-29
  3.1 穿心莲内酯抑制人舌鳞状细胞癌 Tca8113 细胞的增殖活性  23-24
    3.1.1 AD作用于人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞后细胞的形态学变化  23
    3.1.2 MTT法检测AD对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制作用  23-24
  3.2 穿心莲内酯作用于人舌鳞癌 Tca8113 细胞后细胞周期的分布比例变化14  24-26
  3.3 穿心莲内酯作用于人舌鳞状细胞癌 Tca8113 细胞后对 Bax、Bcl-2 基因mRNA 表达水平的影响  26-29
    3.3.1 不同浓度的AD作用舌鳞癌细胞24h后对Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响  26-27
    3.3.2 对照组、各实验组的总RNA完整性及经RT-PCR法扩增后表达水平  27-29
第4章讨论  29-34
  4.1 不同浓度的穿心莲内酯对人舌鳞状癌 Tca8113 细胞增殖的影响  29-30
  4.2 不同浓度的穿心莲内酯对舌鳞癌 Tca8113 细胞周期分布的影响  30-32
    4.2.1 细胞周期的检测点与肿瘤的关系  30-31
    4.2.2 AD对细胞周期的影响  31-32
  4.3 穿心莲内酯对人舌鳞癌 Tca8113 细胞 Bax 基因、Bcl-2 基因 mRNA 表达的影响  32-34
第5章结论与展望  34-35
  5.1 结论  34
  5.2 展望  34-35
致谢  35-36
参考文献  36-39
附录  39-42
攻读学位期间的研究成果  42-43
综述  43-50
  参考文献  48-50

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