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转化生长因子β1及缺氧对人胰腺癌PANC-1细胞株EMT和干细胞表型的调节作用
作 者: 赵慧贞
导 师: 赵秋
学 校: 华中科技大学
专 业: 消化内科
关键词: 胰腺癌 上皮间质转换 转化生长因子β1 缺氧 干细胞表型
分类号: R735.9
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 4次
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内容摘要
目的:探讨转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)及缺氧体外对胰腺癌细胞株PANC-1上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)和干细胞特征的影响。方法:分别以TGF-β110ng/ml和1%O2物理缺氧处理人胰腺癌PANC-1细胞株不同时间后,应用蛋白质印迹法(Western Blot)检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)、E-cadherin、vimentin、 CD133、OCT-4的蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative-PCR)检测E-cadherin、vimentin、CD133、OCT-4mRNA的水平;利用流式细胞仪检测TGF-β110ng/ml和1%物理缺氧处理前后细胞PANC-1细胞株中CD133+细胞的百分比。结果:TGF-β1及缺氧均可改变胰腺癌细胞株PANC-1细胞的形态,使其由上皮细胞形态转变为间质细胞形态。PANC-1细胞经TGF-β1处理12h、24h、36h、48h后,蛋白质印迹法检测结果显示随着处理的时间延长vimentin和CD133表达明显增加、E-cadherin和OCT-4表达明显下调(p<0.05)。Real-time PCR显示随着处理的时间延长vimentin和CD133mRNA水平明显增加、E-cadherin和OCT-4mRNA水平明显下调(p<0.05)。流式细胞学结果显示,经TGF-β1处理12h、24h、36h、48h后,CD133+细胞百分比分别为10.64%、34.87%、21.12%、28.33%,与对照组相比具有显著性统计学差异(p<0.05)。PANC-1细胞经1%O2缺氧处理2h、4h、6h、12h后,蛋白质印迹法检测结果显示缺氧处理4h、6h、12h后HIF-1α表达逐渐增加,具有显著性统计学意义(p<0.05);随着缺氧时间延长,vimentin和CD133表达逐渐增加,E-cadherin和OCT-4表达逐渐下调(p<0.05);Real-time PCR显示vimentin和CD133mRNA水平逐渐增加,E-cadherin和OCT-4mRNA水平逐渐下调(p<0.05)。流式细胞学结果显示缺氧处理2h、4h、6h、12h后,CD133+细胞百分比分别为4.16%、3.46%、3.46%和1.69%,差异无统计学意义(p>0.05)。结论:转化生长因子β1及缺氧均可诱导胰腺癌细胞株PANC-1发生EMT,同时伴有胰腺癌干细胞表面分子CD133水平上调以及OCT4水平降低。
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全文目录
英文缩略词表 5-8 中文摘要 8-10 Abstract 10-12 前言 12-14 材料与方法 14-31 实验结果 31-44 讨论 44-49 参考文献 49-54 综述 54-67 参考文献 60-67 附录 攻读期间发表论文情况 67-68 致谢 68
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胰腺肿瘤
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