学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

IL-33与胃癌细胞化疗敏感性的关系及机制研究

作　者: 蒋海忠
导　师: 丁小云
学　校: 宁波大学
专　业: 内科学
关键词: IL-33 胃癌 化疗敏感性
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 3次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的胃癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病率、死亡率都较高。胃癌的治疗主要以手术为主，同时辅助放化疗。但多数患者诊断时多处于Ⅲ、Ⅳ期，行手术治疗效果较差。因此，胃癌治疗的新辅助化疗逐步受到国内外专家学者的重视，已成为临床常规治疗方案。IL-33（Interleukin-33, IL-33）是新近发现的一种细胞因子，其受体ST2在很多细胞中表达。它不仅能与其受体结合参与各种炎症反应，还能作为一种细胞内核因子，通过其氨基酸末端结构与核小体表面的酸性口袋相结合从而参与基因的转录调控。研究发现IL-33在胃癌患者血清中高表达，且与患者临床预后相关。因此，我们研究IL-33是否对胃癌细胞化疗敏感性有影响，探讨其可能存在的机制，为今后临床个性化化疗方案提供理论依据。方法1、免疫细胞化学（Immunocytochemistry, ICC）方法检测MGC-803是否存在IL-33受体ST2的表达。2、IL-33蛋白预处理细胞24h，加入顺铂（CDDP）4g/ml，48h后MTT、流式细胞仪测增殖凋亡，蛋白免疫印迹技术（Western blot）测caspase-3的蛋白表达。3、构建Ad-IL-33-EGFP、Ad-EGFP腺病毒载体，分别感染胃癌细胞得到MGC-8-3-IL-33、MGC-803-Mock，24h后加入CDDP。应用MTT测定细胞增殖，Westernblot测caspase-3、PARP的蛋白表达水平，实时定量逆转录-聚合酶链反应（real-time reverse transcription-PCR，qRT-PCR）测定ERCC1、BRCA1基因mRNA水平。结果1、胃癌细胞MGC-803存在IL-33受体ST2的表达。2、IL-33蛋白预处理细胞后加入CDDP，MTT、流式细胞结果显示IL-33对细胞的增殖及凋亡无显著影响，Western blot实验发现caspase-3蛋白表达水平无显著差异(P0.05)。3、MGC-803-IL-33、MGC-803-Mock、MGC-803细胞给予相同浓度CDDP处理，MTT结果显示MGC-803-IL-33细胞增殖能力较强(P<0.05)，Western blot结果提示MGC-803-IL-33组细胞caspase-3及PARP蛋白活化程度较低(P<0.05)，qRT-PCR测定发现，MGC-803-IL-33细胞ERCC1基因mRNA表达升高(P<0.05)。结论本实验结果证实在胃癌细胞表面存在IL-33受体ST2的表达。重组人IL-33蛋白对肿瘤细胞的化疗敏感性无显著影响。以Ad-IL-33-EGFP腺病毒为载体感染胃癌细胞后实验发现，高表达IL-33的细胞对化疗药物敏感性下降。同时qRT-PCR结果显示MGC-803-IL-33细胞ERCC1mRNA水平明显升高。分析显示IL-33高表达导致肿瘤细胞对顺铂的敏感性下降，其机制可能是通过上调ERCC1基因的表达增强DNA损伤后的修复能力而产生耐药。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-10
引言  10-12
1 研究内容和技术路线  12-14
  1.1 研究内容  12-13
    1.1.1 IL-33 蛋白对胃癌细胞 MGC-803 化疗敏感性的影响  12
    1.1.2 提高胃癌细胞内 IL-33 水平对化疗敏感性的影响  12-13
  1.2 技术路线  13-14
2 材料和方法  14-25
  2.1 材料  14-16
    2.1.1 主要仪器  14
    2.1.2 主要试剂  14-15
    2.1.3 主要试剂盒  15
    2.1.4 胃癌细胞株  15-16
  2.2 方法  16-25
    2.2.1 细胞培养  16-17
    2.2.2 MTT 测定化疗药物 CDDP 的 48h 半抑制浓度（IC50）  17
    2.2.3 ICC 测定胃癌细胞 MGC-803 细胞膜 IL-33 受体 ST2 的表达  17-18
    2.2.4 MTT 法测定细胞增殖情况  18
    2.2.5 最佳感染复数（multiplicity of infection，MOI）的测定  18-19
    2.2.6 流式细胞术测定细胞凋亡情况  19
    2.2.7 Western blot 方法测定蛋白表达水平  19-21
    2.2.8 qRT-PCR 实验  21-24
    2.2.9 统计方法  24-25
3 实验结果  25-33
  3.1 IL-33 蛋白对胃癌细胞化疗敏感性的影响  25-28
    3.1.1 化疗药物 CDDP IC50 测定  25
    3.1.2 免疫细胞化学检测肿瘤细胞膜 IL-33 受体 ST2 的表达  25-26
    3.1.3 不同浓度的 IL-33 蛋白对胃癌细胞化疗敏感性的影响  26
    3.1.4 流式细胞仪测定 IL-33 蛋白对顺铂诱导的胃癌细胞凋亡的影响  26-27
    3.1.5 Western blot 测定细胞内 caspase-3 蛋白表达水平  27-28
  3.2 提高细胞内 IL-33 水平对胃癌细胞化疗敏感性的影响  28-33
    3.2.1 MOI 测定  28-29
    3.2.2 qRT-PCR 检测感染病毒后细胞 IL-33 的表达  29
    3.2.3 MTT 测定细胞增殖  29-30
    3.2.4 Western blot 测定细胞内 capase-3 及 PARP 蛋白的活性  30-31
    3.2.5 qRT-PCR 测定细胞内 ERCC1 及 BRCA1 基因 mRNA 的表达。  31-33
4 讨论  33-36
5 结论  36-37
参考文献  37-39
附录A  39-45
  参考文献  42-45
在学研究成果  45-46
致谢  46

相似论文

  1. 冬凌草甲素调控周期相关蛋白抑制SGC-7901细胞增殖作用的研究,R285
  2. CADPE抗肿瘤作用及对胃癌细胞凋亡的影响,R735.2
  3. 郁仁存教授学术思想和临床经验总结与益气活血解毒方联合化疗治疗晚期胃癌的临床观察,R249
  4. PRL-3和p27在胃癌中的表达及临床意义,R735.2
  5. PTEN、Caspase-7在胃癌与癌前病变中表达及意义,R735.2
  6. 黏附分子P-选择素在胃癌腹膜转移中的表达及临床意义,R735.2
  7. 趋化因子CCL22及受体CCR4与胃癌腹膜乳斑转移关系的研究,R735.2
  8. 648例胃癌回顾性分析,R735.2
  9. EGFR、K-ras、P53及Ki-67蛋白在大肠癌、胃癌和食管癌表达的研究,R735
  10. 胃癌伴临床实验指标的变化特点及其与15个STR位点的关联,R735.2
  11. p53、PCNA和PTEN在胃癌组织中的表达及其临床意义研究,R735.2
  12. 趋化因子受体CXCR1、CXCR2、CCR在胃癌腹膜转移中的表达及意义,R735.2
  13. NHE1在胃癌酸性微环境中的调控作用及其意义,R735.2
  14. 微囊化人胃癌细胞培养模型建立及实验研究,R735.2
  15. Her-2/Neu及Ki-67在胃癌组织中的表达及其临床意义,R735.2
  16. ERCC1在胃癌组织中的表达及其临床意义,R735.2
  17. 胃泌素及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45增殖及TFFs表达的影响,R735.2
  18. 胃癌D3淋巴结清扫术在进展期胃癌患者的临床疗效观察,R735.2
  19. 糖皮质激素治疗对支气管哮喘患者血清IL-18、IL-33水平的影响,R562.25
  20. 胃癌术后胃瘫综合症对多潘立酮治疗的临床反应,R573
  21. SIRNA干扰转录因子SOX2和OCT4对胃癌干细胞增殖的影响,R735.2

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com