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胃泌素及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45增殖及TFFs表达的影响

作　者: 杨莹莹
导　师: 吴会超
学　校: 遵义医学院
专　业: 消化内科
关键词: 胃泌素 三叶因子1 三叶因子2 三叶因子3 胃癌
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：探讨17肽胃泌素(Gas-17)和三叶因子家族(trefoil factor family, TFFs)在胃癌组织中表达的相互关系及胃泌素对胃癌细胞增殖和TFFs表达的影响,并分析TFFs在胃癌病变过程中的作用。方法：取正常胃黏膜(normal gastric mucosa, NGM)、肠上皮化生(intestinal metaplasia, IM)、不典型增生(dimethyl sulfoxide, Dys)及胃癌组织(gastric cancer, GC)各30例,采用SP免疫组化法检测各组织中Gas-17、TFFs蛋白的表达变化。培养人胃癌细胞株MKN45后按药物干预分组：第1组：17肽胃泌素(Gas-17)组,培养液中Gas-17终浓度为1～1000nmol/L;第2组：丙谷胺(PGL)组,培养液中PGL终浓度为0.1～10mmol/L;第3组：17肽胃泌素+丙谷胺组,培养液中Gas-17终浓度为100nmol/L、PGL终浓度为1～10mmol/L;以不加药培养液为对照组。采用噻唑蓝(MTT)比色法观察各组细胞增殖活力改变。蛋白免疫印迹法(Western-Blot)测定胃泌素组(培养液中Gas-17终浓度为1～100nmol/L),丙谷胺组(PGL终浓度为10mmol/L),联合用药组(Gas-17终浓度为100nmol/L、PGL终浓度为10mmol/L)及不加药对照组中TFFs蛋白的表达变化。结果：免疫组化结果显示：Gas-17的表达在胃癌组和不典型增生组均高于正常组,差异存在统计学意义(p<0.01,p<0.05),胃癌组高于不典型增生组(p<0.05); TFF1、TFF2的表达在胃癌组和不典型增生组均低于正常组(p<0.01,p<0.05),胃癌组低于不典型增生组(p<0.05); TFF3的表达在胃癌组和不典型增生组均高于正常组(p<0.01,p<0.05),胃癌组高于不典型增生组(p<0.05)。经Spearman等级相关分析结果显示：胃泌素与TFF1、TFF2表达呈负相关(r1=-0.349、r2=-0.425,p<0.05),胃泌素与TFF3表达呈正相关(r3=0.683,p<0.05)。TFF1、TFF2表达强度与胃癌的分化程度有关p<0.05),随胃癌分化程度降低TFF1、TFF2表达减弱,与性别、年龄和胃癌分期无关(p>0.05); TFF3表达与胃癌分期及分化程度有关(p<0.05),随胃癌的进展和分化降低表达增多(p<0.05),与性别、年龄无关。MTT结果显示：Gas-17在1～1000nmol/L时具有明显的促MKN45细胞增殖作用(p<0.05)；PGL在1～10mmol/L时有显著的抑制MKN45细胞增殖作用(p<0.05)；Gas-17+PGL组中,PGL(1-10mmol/L)能阻断并抑制Gas-17对胃癌细胞MKN45的促增殖作用(p<0.05)。WB结果显示：胃癌细胞株MKN45中有TFFs蛋白的表达。在Gas-17组中TFF1及TFF2蛋白表达减弱(p<0.05),而TFF3蛋白表达增强(p<0.05)；PGL组中TFF1及TFF2蛋白表达增强而TFF3蛋白表达减弱；Gas-17+PGL组中,PGL能阻断Gas-17诱导的TFF1及TFF2蛋白表达下调(p<0.05),阻断Gas-17诱导的TFF3蛋白表达上调(p<0.05)。结论：TFF1、TF2表达与Gas-17表达呈负相关,TFF3表达与Gas-17表达呈正相关。Gas-17可诱导人胃癌细胞MKN45增殖,抑制TFF1、TFF2蛋白表达,促进TFF3蛋白表达,其受体抑制剂PGL能阻断并抑制这一作用。TFF1与TFF2表达减弱和TFF3表达增强,是可能胃泌素诱导胃癌发生发展的的机制之一。

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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