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胃癌相关长链非编码RNA的鉴定及其临床意义的分析

作　者: 宋皓军
导　师: 郭俊明
学　校: 宁波大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 胃癌长链非编码RNA 表达谱 H19 uc001lsz
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的在我国，胃癌是一种高发病率、低生存率的恶性肿瘤之一。与其他肿瘤类似，编码基因与非编码基因的异常表达参与了胃癌的发生、发展。最新的研究表明，长链非编码RNA（Longnon-codingRNA, lncRNA）作为一种新型的非编码RNA，与肿瘤发生、发展有着密切的关系，但它们与胃癌的关系尚未完全阐明，特别是胃癌相关lncRNA的表达谱仍是空白。因此，发现并鉴定与胃癌相关的lncRNA对于提高我们对胃癌发病机制的认识将有重要的意义。本研究拟先揭示胃癌相关lncRNA表达谱，然后探索一些代表性lncRNA在胃癌诊断中的潜在临床价值。方法1.利用lncRNA表达芯片，获得胃癌相关lncRNA表达图谱并绘制出lncRNA与其相关基因相互作用图。2.收集79例胃病患者的胃病变及对应正常组织，包括16例胃癌患者的胃镜活检标本、61例胃癌患者的手术标本和2例胃癌前病变患者的手术标本。3.采用实时定量逆转录-聚合酶链式反应（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction, qRT-PCR）检测胃癌组织、胃癌细胞株及一些其他类型的常见肿瘤细胞株中2种代表性lncRNA（高表达的H19和低表达的uc001lsz）的水平，并以克隆测序技术证实lncRNA的存在。4.分析H19和uc001lsz表达水平与胃癌患者临床病理因素的关系，揭示其可能的胃癌诊断价值。结果1.通过分析胃癌相关lncRNA表达谱，我们发现了135种lncRNA在胃癌组织和癌旁组织中的表达差异超过2倍，其中在胃癌组织中高表达和低表达的分别有71种和64种。2.在胃癌组织中表达低于4倍以上的lncRNA有FER1L4、uc001lsz、BG491697、AF131784、uc009ycs、BG981369、AF147447、HMlincRNA1600和AK054588等9种。3.在胃癌组织中表达高于4倍以上的lncRNA有H19、HMlincRNA717、BM709340、BQ213083、AK054978和DB077273等6种。4. H19在胃癌组织及细胞、肝癌细胞中高表达，而在肺癌和前列腺癌细胞中低表达。5. uc001lsz在胃癌组织及细胞、肺癌和肝癌细胞中低表达，而在前列腺癌细胞中高表达。6. uc001lsz的表达水平与胃癌的发生发展进程有关。结论据我们了解，本研究是第一个较系统研究胃癌相关lncRNA表达谱的研究。通过检测2种代表性lncRNA（H19和uc001lsz）在胃癌组织及细胞中的表达水平，说明了它们在胃癌发生过程中可能起作用。这些新发现将会为胃癌的诊断和治疗提供思路。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-11
引言  11-13
1 研究内容和技术路线  13-15
  1.1 研究内容  13-14
    1.1.1 分析胃癌相关 lncRNA 的表达谱  13
    1.1.2 验证 qRT-PCR 可作为检测 lncRNA 的方法  13
    1.1.3 分析常见肿瘤细胞株中 H19 的表达水平  13
    1.1.4 分析胃癌组织中 H19 的表达水平  13
    1.1.5 分析常见肿瘤细胞株中 uc001lsz 的表达水平  13
    1.1.6 分析胃癌组织中 uc001lsz 的表达水平  13-14
  1.2 技术路线  14-15
2 材料与方法  15-25
  2.1 材料  15-17
    2.1.1 主要仪器设备  15
    2.1.2 主要试剂  15-17
    2.1.3 入组的患者情况  17
    2.1.4 患者知情同意情况  17
  2.2 方法  17-25
    2.2.1 组织样本的收取与保存  17-18
    2.2.2 总 RNA 的提取  18-19
    2.2.3 总 RNA 定量与纯度分析  19
    2.2.4 lncRNA 表达芯片分析  19
    2.2.5 探索 lncRNA 与 mRNA 共同表达的网络  19
    2.2.6 实时定量 RT-PCR 引物合成  19-20
    2.2.7 细胞培养  20-21
    2.2.8 qRT-PCR 技术检测 lncRNA 的水平  21-23
    2.2.9 PCR 产物纯化  23-24
    2.2.10 克隆测序  24
    2.2.11 统计分析  24-25
3 实验结果  25-37
  3.1 建立胃癌相关的 lncRNA 的表达谱  25-26
  3.2 构建 lncRNA-mRNA 表达关联网  26-28
  3.3 各种细胞株的培养  28
  3.4 H19 在胃癌组织中高表达  28-30
  3.5 H19 在常见的肿瘤细胞株中的表达水平  30
  3.6 uc001lsz 在胃癌组织中低表达  30
  3.7 uc001lsz 在常见肿瘤细胞株的表达水平  30
  3.8 对 H19、uc001lsz 的 PCR 结果进行测序  30-33
  3.9 H19、uc001lsz 与胃癌患者的临床病理因素的关系  33-35
  3.10 uc001lsz 在胃癌前病变和早期胃癌中的异常表达  35-37
4 讨论  37-40
5 总结  40-41
参考文献  41-45
附录A 缩略词  45-47
附录B 综述  47-63
在学研究成果  63-64
致谢  64

胃癌相关长链非编码RNA的鉴定及其临床意义的分析

内容摘要

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