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携带IL-24和MnSOD双基因的溶瘤痘苗病毒靶向治疗癌症的研究

作　者: 杨冬梅
导　师: 刘新垣
学　校: 浙江理工大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 基因病毒治疗 IL-24 MnSOD 痘苗病毒
分类号: R730.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

基因治疗癌症已经被应于临床但是效果并不理想，病毒在癌症中的应用有很多种，把基因和病毒相结合而形成的新策略-靶向基因病毒治疗癌症，用于其中的病毒称为溶瘤病毒。这种方法具有转染率高、靶向性好、抗癌基因表达量高和溶瘤病毒杀伤力强的优势，两者协同作用，从而进一步提高抗肿瘤的疗效。但是溶瘤病毒的应用关键是其载体的选择，本研究所用的是一种新的溶瘤痘苗病毒，为病毒在癌症上的治疗提供了新的策略。IL-24作为肿瘤基因治疗的热点，能选择性抑制多种肿瘤生长，诱导肿瘤细胞凋亡。MnSOD是一新型肿瘤抑制基因, MnSOD作为细胞内重要的抗氧化酶，可以清除活性氧,可以对细胞产生一系列的损伤，对蛋白和核酸的损伤，所导致细胞的变异包括癌变和细胞的死亡，进而防止细胞癌变。本文应用了F2A连接子将IL-24和MnSOD两个基因连接在痘苗病毒载体上首先得到重组的质粒，在痘苗病毒的野毒的感染两个小时后进一步转染到HEK293细胞中从而得到OncoPox-IL-24-F2A-MnSOD双基因溶瘤痘病毒，我们所以使用的痘苗病毒也是经过改造后的TK缺失的痘苗病毒，之后通过药物筛选除去野毒得到我们溶瘤目的病毒。使用Western blot实验检测了两个基因在蛋白水平均表达，MTT实验检测溶瘤痘苗病毒双基因在结肠癌中的杀伤效果表明双基因溶瘤痘苗病毒杀伤肿瘤细胞的效果要优于单基因溶瘤痘苗病毒。本文首次将IL-24，MnSOD基因通过连接子F2A连接到痘苗载体中得到双基因溶瘤痘苗病毒，为溶瘤痘苗病毒的深入研究打下了基础。我们也检测到双基因双基因溶瘤痘苗病毒在结肠癌中的杀伤效果明显，为结肠癌的临床治疗提供一种新的策略。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-6
缩略词  6-7
目录  7-9
1 引言  9-14
  1.1 溶瘤痘苗病毒的简介  11-12
    1.1.1 痘苗病毒的优点  11
    1.1.2 痘苗病毒的改造  11-12
  1.2 MnSOD 基因概述  12
  1.3 IL-24 基因概述  12
  1.4 F2A连接子简介  12-13
    1.4.1 多顺反子载体构建策略  12-13
    1.4.2 FMDV 2A 连接子  13
  1.5 本课题的创新点  13-14
2 实验材料与方法  14-31
  2.1 实验材料  14-17
    2.1.1 生化试剂  14
    2.1.2 抗体  14
    2.1.3 细胞株  14
    2.1.4 病毒  14-15
    2.1.5 菌株与质粒  15
    2.1.6 主要仪器  15-16
    2.1.7 主要溶液配制  16-17
    2.1.8 引物的设计与合成  17
  2.2 实验方法  17-31
    2.2.1 分子克隆  17-25
    2.2.2 病毒的包装,筛选与鉴定  25-29
    2.2.3 重组溶瘤痘苗病毒的体外实验  29-30
    2.2.4 MTT 检测溶瘤痘苗病毒的杀伤细胞效果  30-31
3 实验结果  31-36
  3.1 重组质粒的鉴定  31-32
    3.1.1 重组双基因质粒酶切鉴定  31
    3.1.2 pCB-MnSOD 的重组质粒鉴定  31-32
  3.2 重组溶瘤痘苗病毒的包装  32
  3.3 重组溶瘤痘苗病毒鉴定  32-34
  3.4 Western Blot 检测重组溶瘤病毒目的基因表达水平  34-36
    3.4.1 IL-24 蛋白水平表达检测  34-35
    3.4.2 MnSOD 蛋白水平表达检测  35-36
  3.5 MTT 检测重组溶瘤痘苗病毒对肿瘤细胞的杀伤性  36
4 讨论与展望  36-38
参考文献  38-41
致谢  41

携带IL-24和MnSOD双基因的溶瘤痘苗病毒靶向治疗癌症的研究

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