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来氟米特对高糖诱导的足细胞裂孔隔膜及细胞骨架影响及机制研究
作 者: 柴蔚霞
导 师: 于为民
学 校: 山西医科大学
专 业: 内科学
关键词: 足细胞 细胞骨架 NF-κ Bp65 受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6) 来氟米特 高糖
分类号: R692
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 5次
引 用: 0次
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内容摘要
目的:1.通过建立体外高糖刺激的足细胞模型,检测足细胞NF-κ B、TRPC6、 nephrin、F-actin的表达情况及A771726干预的影响并探讨其可能的作用机制。2.初步探讨A771726对体外高糖培养足细胞保护作用及可能的作用机制。方法:条件永生的人肾小球足细胞株分为正常糖组、甘露醇高渗对照组、高糖刺激组、高糖+PDTC (pyrrolidine dithiocarbamate为NF-κ B通路特异性抑制剂)组及高糖+A771726(来氟米特活性代谢产物)组。用Western印迹法测定足细胞NF-κ Bp65途径的活化即p-NF-κ Bp65/NF-κ Bp65比值,Western印迹法、半定量RT-PCR测定NF-κ Bp65、TRPC6、nephrin在肾小球足细胞的表达。免疫荧光染色法检测足细胞骨架的变化。结果:1.高糖刺激足细胞激活NF-κ Bp65信号通路,60min时p-NF-κ Bp65蛋白表达与Omin比显著增加(1.20±0.04比0.79±0.02,P<0.01):正常糖组和高渗对照组仅有少量NF-κ Bp65活化;PDTC及A771726可明显抑制p-NF-κ Bp65表达(P<0.05),NF-κ Bp65mRNA表达各组之间差异无统计学意义(P>0.05)2.高糖刺激足细胞激活NF-κ Bp65信号通路后,TRPC6mRNA及蛋白表达较正常组高,nephrin mRNA及蛋白表达较正常组降低;PDTC及A771726可抑制TRPC6高表达,使nephrin表达较高糖组增多(均P<0.05)。3.免疫荧光法检测高糖刺激足细胞72h后可见细胞骨架蛋白微丝肌动蛋白(F-actin)紊乱及张力纤维消失。结论:来氟米特活性代谢产物A771726可通过阻断高糖诱导的NF-κBp65信号通路的活化对足细胞起保护作用。
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全文目录
中文摘要 5-7 Abstract 7-9 前言 9-11 1.实验材料 11-13 2.主要试剂配制 13-17 3.实验方法 17-22 4.统计学方法 22-23 结果 23-30 讨论 30-33 结论 33-34 参考文献 34-37 综述 37-47 参考文献 43-47 英文缩略词表 47-48 个人简介及发表论文 48-49 致谢 49
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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 泌尿科学(泌尿生殖系疾病) > 肾疾病
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