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大鼠骨髓间充质干细胞的提取与鉴定

作　者: 邹超
导　师: 赵文海
学　校: 长春中医药大学
专　业: 中医骨伤科学
关键词: 骨髓间充质干细胞周围神经损伤发病机制细胞分化
分类号: R651.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：本课题的研究内容属基础研究，目的是通过对SD大鼠骨髓间充质干细胞的体外提取、分离、培养及生物学特性鉴定，实验室进行细胞水平检测，揭示骨髓间充质干细胞细胞生长周期，并诱导部分可分化方向。为骨髓间充质干细胞在周围神经损伤病变修复过程起到的作用提供理论基奠并对研究修复周围神经损伤的进一步实验提供可行性实验研究方案。方法：本实验通过对一周龄SD大鼠进行骨髓间充质干细胞的提取、分离、培养、鉴定及成脂及成骨方向诱导分化。在实验中我们通过倒置相差显微镜观察实验中所提取的细胞的细胞形态、贴壁情况；在传代培养过程中观察细胞增殖情况并描绘生长曲线。选择生长稳定的第3代细胞，应用流式细胞仪检测该细胞的细胞生长周期。在实验中利用骨髓间充质干细胞表面抗原标记物经流式细胞仪进行测定，结果证实所得细胞为骨髓间充质干细胞。实验中通过利用成脂及成骨诱导剂诱导实验提取细胞，结果一方面证实其可向成骨及成脂分化，亦从另一方面证实本实验所得细胞为骨髓间充质干细胞。根据骨髓间充质干细胞的原代培养表型鉴定结果，证实骨髓间充质干细胞具有易获得、易培养、低免疫原性、能在宿主体外长期存活、易于外源基因转染和长期表达等优点，可作为理想的种子细胞。结果：本实验通过对SD大鼠骨髓来源的间充质干细胞成功的进行了体外提取、分离、培养、鉴定及向部分可分化方向诱导。在学习和实践中，熟练掌握了对该细胞的提取、分离、培养的实验方法；充分了解该细胞体外生长条件及其生长整个过程中细胞变化等；熟悉了该细胞生长周期及可分化方向等一般生物学特征。实验证实该细胞为干细胞移植最优选择，并为后续实验研究提供可靠、稳定的移植细胞株，为下一步实验研究提供实验和理论依据。

全文目录

中文摘要  6-7
ABSTRACT  7-9
英文缩略语  9-10
前言  10-11
文献综述  11-26
  1. 周围神经损伤  11-14
    1.1 关于周围神经损伤的传统医学研究  11-12
    1.2 关于周围神经损伤的现代医学研究  12-14
  2. 周围神经损伤的治疗  14-19
    2.1 周围神经损伤的传统中医治疗手段  14-15
    2.2 周围神经损伤的现代医学治疗手段  15-19
    2.3 中西医结合治疗  19
  3．骨髓间充质干细胞的相关研究  19-23
    3.1 BMSCs 的概念  19
    3.2 BMSCs 的形态学特征  19-20
    3.3 BMSCs 分离方法  20-22
    3.4 BMSCs 培养的基本条件  22
    3.5 BMSCs 的诱导分化  22-23
    3.6 BMSCs 的检测  23
  4 BMSCs 对周围神经损伤的作用研究  23-26
    4.1 BMSCs 直接分化为神经元  24
    4.2 BMSCs 分泌神经营养因子  24
    4.3 BMSCs 促进内源性干细胞迁移及对损伤部位靶点的归巢  24
    4.4 BMSCs 促进新血管再生  24-25
    4.5 BMSCs 对周围神经损伤修复作用的现状与展望  25-26
实验研究  26-35
  1 实验材料  26-29
    1.1 实验动物  26
    1.2 试剂  26-28
    1.3 主要仪器及设备  28-29
  2 实验方法  29-32
    2.1 大鼠 BMSCs 的分离  29
    2.2 大鼠 BMSCs 的培养和传代扩增  29-31
    2.3 大鼠 BMSCs 一般生物学特性的观察  31-32
  3 大鼠 BMSCs 的多向分化能力的检测  32-33
    3.1 成骨细胞诱导  32-33
    3.2 成脂肪细胞诱导  33
  4 大鼠 BMSCs 表面标志检测  33
  5 实验结果  33-35
    5.1 一般观察  33-34
    5.2 细胞增殖实验结果  34
    5.3 诱导分化鉴定  34-35
讨论  35-38
结语  38-39
致谢  39-40
参考文献  40-47
附图  47-49

大鼠骨髓间充质干细胞的提取与鉴定

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