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H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤时HIF-1与ROCK-1的表达及相互作用

作　者: 江龙
导　师: 程晓曙
学　校:
专　业: 内科
关键词: 缺氧诱导因子-1 ROCK激酶 缺氧/复氧 心肌细胞
分类号: R541
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的:研究在H9c2心肌细胞在缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation, H/R）条件下缺氧诱导因子（hypoxia inducible factor-1, HIF-1）与ROCK激酶（Rho-associatedkinase1, ROCK-1）的表达及相互关系，以及两者对心肌细胞的作用机制。方法：（1）通过体外培养H9c2心肌细胞，建立缺氧复氧模型（95%N2和5%CO2）；（2）通过Western blot印迹法分别检测缺氧和复氧时HIF-1与RCOK-1的蛋白表达情况；筛选出表达最高的缺氧和复氧时间点；（3）在筛选好的缺氧10h和复氧6h、8h、10h时间点进行缺氧复氧处理。然后实验分四组进行：①正常对照组；②H/R组；③H/R加YC-1组(HIF-1抑制剂)；④H/R加Y-27632组（ROCK-1抑制剂）；（4）采用RT-PCR和Western blot印迹检测各组间HIF-1与ROCK-1的mRNA和蛋白表达情况，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，MTT检测细胞生长活力。结果：（1）心肌细胞缺氧处理时，HIF-1与ROCK-1蛋白表达量均明显增加，缺氧10h时均有较明显的表达；（2）在0~24h的复氧时间里，HIF-1与ROCK-1的蛋白表达在6h、8h、10h这三个时间段表达较高；（3）于复氧6h、8h、10h时加入HIF-1抑制剂YC-1后，结果显示：HIF-1及ROCK-1的蛋白表达显著低于对应时间段的H/R组（P <0.05）；细胞凋亡率显示与H/R组相应各组间对比显著降低（P <0.05）；MTT显示细胞存活率与H/R组相比明显升高（P <0.05）;（4）于复氧6h、8h、10h时加入ROCK-1抑制剂Y-27632后，结果显示:①ROCK-1的mRNA和蛋白表达均低于H/R组和正常组（P <0.05），而HIF-1的蛋白及mRNA表达明显高于H/R组（P <0.05）；细胞凋亡率显示与H/R组相应各组间对比显著升高（P <0.05）；MTT显示细胞存活率与H/R组相比，明显降低下降（P <0.05）。结论：（1） H9c2心肌细胞在缺氧/复氧条件下，HIF-1与ROCK激酶分别在缺氧10h和12h表达达高峰；在复氧4h，6h，8h,10h有较高的表达；（2）抑制HIF-1的表达，可使H9c2心肌细胞在缺氧10h和复氧6h-10h时抑制细胞凋亡；（3）在H9c2心肌细胞缺氧10h复氧6h-10h的条件下，抑制ROCK-1激酶促进细胞凋亡；（4）HIF-1与ROCK-1关系密切且相互影响，在H9c2心肌细胞的缺氧/复氧条件下，HIF-1可能调控ROCK-1激酶的表达。

全文目录


摘要  3-5
ABSTRACT  5-10
第1章 引言  10-12
第2章 材料与方法  12-22
  2.1 材料  12-15
    2.1.1 主要使用仪器  12
    2.1.2 主要购买试剂  12-13
    2.1.3 试剂配制  13-15
  2.2 方法  15-21
    2.2.1 H9C2 心肌细胞培养  15-16
    2.2.2 H9C2 心肌细胞 H/R 模型的建立  16
    2.2.3 实验分组  16-17
    2.2.4 V-FITC 法检测细胞凋亡率  17
    2.2.5 细胞存活率检测（MTT 法）  17-18
    2.2.6 Western blot 操作步骤  18-19
    2.2.7 RT-PCR 操作步骤  19-21
    2.2.8 条带灰度值分析  21
  2.3 数据处理和统计学分析  21-22
第3章 结果  22-30
  3.1 缺氧时 HIF-1 与 ROCK-1 的蛋白表达  22-23
  3.2 复氧时的相关结果  23-30
    3.2.1 HIF-1 与 RCOK-1 的蛋白表达情况  23-25
    3.2.2 HIF-1 与 RCOK-1 的 mRNA 表达情况  25-26
    3.2.3 缺氧复氧时细胞凋亡率的变化  26-28
    3.2.4 缺氧复氧时细胞存活率的变化  28-30
第4章 讨论  30-34
  4.1 HIF-1 在心肌缺血/再灌注中的作用  30-31
  4.2 ROCK-1 在心肌缺血/再灌注中的作用  31-32
  4.3 在心肌缺血/再灌注中 HIF-1 与 ROCK-1 的相互关系  32-34
第5章 结论与展望  34-35
  5.1 结论  34
  5.2 不足之处和展望  34-35
致谢  35-36
参考文献  36-39
攻读学位期间的研究成果  39-40
综述  40-46
  参考文献  45-46

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管（循环系）疾病 > 心脏疾病
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