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阿尔茨海默症疫苗研究和乙肝疫苗临床免疫评价体系研究

作　者: 王爽
导　师: 王宾
学　校: 中国农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 共免疫疫苗阿尔茨海默症尼扎替丁乙克免疫评价
分类号: R392
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

疫苗能够调动机体的免疫反应,对抗原作出适宜的免疫应答,从而达到治疗疾病的目的。针对许多慢性疾病目前尚无有效治疗药物,而疫苗由于特异性好、成本低等优点,成为许多慢性疾病治疗领域研究的热点。阿尔茨海默症(AD)是一种神经系统的慢性急病,其病因是由于p淀粉样蛋白(Aβ)在大脑中沉积,对神经纤维产生毒性作用,使其损伤而导致疾病的发生。抗Aβ42的蛋白疫苗由于其能诱导高滴度抗体而被确认对AD有减轻病情的效果,但是由于其引起了针对于Aβ42的T细胞侵润脑部导致临床实验失败。如何保持高滴度抗体并且抑制T细胞的炎性反应是Aβ42疫苗改进的方向。本论文第一部分根据本实验室发现蛋白与DNA共免疫可以诱导调节性T细胞,抑制效应T细胞的炎症反应同时不影响抗体滴度,在抗原形式上采用Aβ42共免疫疫苗作为新型AD疫苗。研究中我们证明了Aβ42共免疫疫苗能诱导高水平的针对于Aβ42的抗体,同时能够很好地抑制CD4+T细胞介导的炎症反应。这种免疫治疗方法不仅可以改善AD模型小鼠的认知和学习能力,减轻脑部淀粉样蛋白的沉积,还可以有效地抑制T细胞介导的炎症反应,阻止CD4+T细胞侵润中枢神经系统。我们除了对抗原的形式进行了改进探索,同时还对佐剂的改进进行了初步的研究,采用免疫抑制剂和增强型免疫佐剂同时进行筛选,用共免疫体系验证加入佐剂后的效果。在对佐剂的研究中,发现加入免疫抑制剂并不能够维持共免疫的免疫抑制效果,而增强型免疫佐剂能够维持共免疫的免疫抑制效果。我们在流感模型中进行了增强型佐剂的筛选,确定了小分子化合物尼扎替有丁有较强的免疫增强作用,并在共免疫体系中进行了验证,初步确定了该佐剂用于AD共免疫疫苗的可能性。Aβ42蛋白疫苗失败于炎症副反应,同时也显示出目前几乎所有治疗性疫苗研发中的一个薄弱环节,就是治疗性疫苗的评价只侧重于病情改善和病理评价,不能从免疫学角度去预测疫苗可能造成的效果和副反应,针对这一情况,本论文第二部分以乙肝治疗性疫苗—乙克(YIC)小临床实验为依托,通过检测特异性T细胞的免疫反应来建立疫苗的临床免疫学评价体系。T细胞功能主要通过其分泌的细胞因子实现,因此在本研究中检测CD4+T和CD8+T表达的共21种细胞因子,分析其表达水平、临床表型变化和免疫次数的相关性,结果发现疫苗组与安慰剂组的ALT和HBV DNA水平在抗病毒药物的干预下二者没有区别,但是在免疫学上,特别是CD4和CD8的活化状态上有了区别于其它两组的差异,推测乙肝治疗性疫苗可能是通过激活APC细胞,活化CD4+T细胞,使其在四免后大量的表达活化性的细胞因子,处于活化状态,进而辅助激活CD8+T细胞,增强其杀伤功能起到免疫学作用的,从而为接下来大规模的临床实验提供了可能的检测方案和检测指标,以期初步建立乙肝治疗性疫苗的临床检测系统。综上所述,本论文对于AD研究了一种新型的治疗性疫苗,在动物实验中证明了疫苗的治疗效果和安全性,并用尼扎替丁为佐剂对疫苗进行了进一步改进；同时以乙克小临床实验为依托,检测免疫前后T细胞免疫反应的变化,初步寻找到了临床实验中与疫苗免疫相关的检测指标。通过这两部分工作,为治疗性疫苗的研发和进入临床提供了新的视点。

全文目录

中文摘要  5-6
Abstract  6-8
目录  8-10
图表清单  10-12
缩略词表  12-14
实验主要仪器  14-16
第一章论文研究背景  16-36
  1.1 阿尔茨海默症疫苗研究现状  16-26
    1.1.1 阿尔茨海默症简介  16
    1.1.2 阿尔茨海默症发病机理  16-17
    1.1.3 阿尔茨海默症治疗现状  17-18
    1.1.4 阿尔茨海默症疫苗最初的研发  18-19
    1.1.5 AD疫苗免疫原的改进研究  19-20
    1.1.6 AD疫苗佐剂的改进研究  20-22
    1.1.7 疫苗的临床实验  22-26
  1.2 调节性T细胞(Treg)对于治疗自主免疫的作用  26-29
    1.2.1 Treg的功能  26-27
    1.2.2 Treg治疗自主免疫性疾病的应用  27-29
  1.3 临床疫苗评价的现状  29-32
  1.4 慢性乙肝治疗性疫苗的研究进展  32-36
    1.4.1 乙型病毒肝炎简介  32
    1.4.2 慢性乙肝的治疗现状  32-33
    1.4.3 治疗性乙肝疫苗的研发现状  33-36
第二章阿尔茨海默症新型疫苗的研发  36-68
  2.1 引言  36-37
  2.2 材料与方法  37-47
    2.2.1 实验动物和试剂  37
    2.2.2 免疫流程  37-41
    2.2.3 ELISA  41
    2.2.4 T细胞增殖实验  41
    2.2.5 流式检测  41-42
    2.2.6 CBA检测脑部炎症因子  42
    2.2.7 脑部老年斑染色  42
    2.2.8 旷场实验  42-43
    2.2.9 水迷宫实验  43
    2.2.10 脑部Aβ蛋白定量实验  43
    2.2.11 MOG-EAE模型诱导  43-44
    2.2.12 Aβ 42-EAE模型诱导和免疫  44
    2.2.13 过继转移实验  44-45
    2.2.14 血凝血抑实验  45
    2.2.15 抗原递呈细胞体外刺激实验  45
    2.2.16 小鼠H5N1攻毒实验  45-46
    2.2.17 实时定量法检测病毒载量  46
    2.2.14 结果统计与分析  46-47
  2.3 实验结果  47-66
    2.3.1 Aβ 42共免疫剂量的摸索及共免疫抑制T细胞效果的检测  47-48
    2.3.2 Aβ 42共免疫治疗APP695阿尔茨海默症模型模型小鼠的效果  48-50
    2.3.3 共免疫疫苗可以抑制CD4+T细胞的增殖和炎性因子的分泌  50-52
    2.3.4 共免疫疫苗可以减轻脑部的淀粉样蛋白沉积  52-54
    2.3.5 Aβ 42脑炎模型的建立及共免疫治疗自主免疫性脑炎模型效果评价  54-60
    2.3.6 Aβ 42共免疫疫苗免疫抑制型佐剂筛选  60-61
    2.3.7 免疫增强型佐剂筛选  61-66
  2.4 小结与讨论  66-68
第三章乙肝治疗性疫苗临床免疫学评价体系研究  68-92
  3.1 引言  68-69
  3.2 材料与方法  69-72
    3.2.1 实验材料和试剂  69
    3.2.2 全血标本采集  69-70
    3.2.3 外周血细胞分离  70
    3.2.4 特异性抗原刺激  70-71
    3.2.5 冻存  71
    3.2.6 流式检测  71
    3.2.7 统计分析  71-72
  3.3 实验结果与分析  72-90
    3.3.1 临床检测条件摸索  72-77
    3.3.2 小临床实验细胞免疫学评价  77-81
    3.3.3 细胞因子表达与临床表现的相关性分析  81-82
    3.3.4 细胞因子表达与免疫时间的相关性分析  82-90
  3.4 小结和讨论  90-92
第四章结论  92-94
参考文献  94-110
致谢  110-112
个人简介  112

阿尔茨海默症疫苗研究和乙肝疫苗临床免疫评价体系研究

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