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中药黄芩苷通过下调miR-294抑制小鼠D3胚胎干细胞增殖能力

作　者: 王键
导　师: 唐明
学　校: 华中科技大学
专　业: 生理学
关键词: 胚胎干细胞 microRNA 原癌基因增殖
分类号: R285.5
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

研究目的：研究中药单体黄芩苷、葛根素和人参皂苷Rg1是否通过改变小鼠胚胎干细胞miR-290家族成员的表达影响D3系小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESCs)的增殖能力。方法：通过细胞计数继而计算倍增时间观察各中药单体对ESCs增殖能力的改变；进行PI染色检测细胞周期的变化；应用qRT-PCR检测原癌基因c-myc、 c-jun和c-fos以及miR-290家族中多种miRNAs的表达的改变；最后采用脂质体转染法过表达相应的miRNAs,得到gain-of-function效应,观测其对ESCs增殖能力的影响和对目的基因表达水平的影响。结果：1、黄芩苷显著抑制ESCs的增殖能力,表现为细胞倍增时间延长,以及明显的G2/M期阻滞和S期细胞减少。2、黄芩苷显著下调了ESCs中原癌基因c-jun和c-fos的表达。3、黄芩苷明显下调ESCs中miR-290家族中的miR-294的表达水平。4、miR-294过表达减少ESCs细胞倍增时间,且逆转黄芩苷导致的ESCs细胞倍增时间增加。5、脂质体转染miR-294mimic过表达miR-294使ESCs中原癌基因c-jun和c-fos的表达上调,且有效逆转黄芩苷导致的c-jun和c-fos的下调。结论：黄芩苷通过下调miR-294进而抑制原癌基因c-jun和c-fos的表达从而抑制ESCs的增殖。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-7
1、引言  7-11
  1.1 国内外研究现状  8-9
  1.2 本论文的主要研究目的以及意义  9-10
  1.3 本论文主要研究内容  10-11
2、材料和方法  11-28
  2.1 实验试剂和材料  11-16
    2.1.1 细胞与动物  11
    2.1.2 主要试剂和材料  11-14
    2.1.3 主要仪器设备  14-16
  2.2 实验方法  16-27
    2.2.1 细胞的分离和培养  16-19
    2.2.2 脂质体转染mi RNA模拟物  19-20
    2.2.3 细胞计数和细胞群体倍增时间的计算  20-21
    2.2.4 PI染色检测细胞周期  21-22
    2.2.5 原癌基因的mRNA的提取和的实时定量PCR  22-25
    2.2.6 miRNAs的提取和实时定量PCR  25-27
  2.3 统计学分析  27-28
3、实验结果  28-46
  3.1 小鼠成纤维细胞和胚胎干细胞的形态学观察  28-31
  3.2 中药单体黄芩苷、葛根素和人参皂苷Rg1对胚胎干细胞增殖能力的影响  31-39
    3.2.1 中药单体黄芩苷、葛根素和人参皂苷Rg1对胚胎干细胞群体倍增时间的影响  31-32
    3.2.2 中药单体黄芩苷、葛根素和人参皂苷Rg1对胚胎干细胞细胞周期分布的影响  32-36
    3.2.3 中药单体黄芩苷、葛根素和人参皂苷Rg1对胚胎干细胞原癌基因mRNA表达水平的影响  36-39
  3.3 中药单体黄芩苷、葛根素和人参皂苷Rg1对胚胎干细胞miR-290 cluster各成员表达的影响  39-42
  3.4 脂质体转染miR-294 mimic对胚胎干细胞的影响  42-46
4 讨论  46-49
5 结论  49-50
6 参考文献  50-56
7 综述  56-77
  参考文献  70-77
8 附录  77-83
  附录一主要英文缩略词表  77-80
  附录二中药单体说明书  80-83
9 致谢  83

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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