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丹参注射液干预脑梗死大鼠SVZ干细胞增殖作用的研究

作　者: 林惠
导　师: 杨万章
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 脑梗死 丹参注射液 rhG-CSF 神经干细胞 增殖
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要


目的：观察丹参注射液对重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony stimulating factor, rhG-CSF)动员后急性脑梗死大鼠双侧脑室室管膜下区(subventricular zone,SVZ)神经干细胞(neural stem cells, NSCs)增殖的影响,及其改善脑梗死后神经功能的可能机制,探讨丹参注射液联合rhG-CSF治疗脑梗死的可能作用途径。方法：成功制作的左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型48只成年雄性SD大鼠,随机分为吉粒芬动员+丹参注射液组、丹参注射液组、吉粒芬动员组、生理盐水组,每组均为12只大鼠,每组按实验方案再分为TTC染色组和冰冻切片组(每个亚组6只),另随机选择12只正常大鼠作为假手术组。各组在治疗前和治疗后第7d时间点,采用改良神经功能损害评分(mNSS)评定各组大鼠的神经功能；TTC染色组检测各组大鼠治疗后的梗死面积；冰冻切片组以免疫荧光染色法检测SVZ内溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)/巢蛋白(nestin、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)/nestin双标阳性细胞表达数量,并进行组内和组间比较；BrdU/神经元特异性核蛋白(NeuN)双标阳性细胞。结果：1、除假手术组外,各组大鼠给药后mNSS评分均低于给药前,差异有统计学意义(P<0.05)；吉粒芬动员+丹参注射液组大鼠mNSS评分较丹参注射液组、吉粒芬动员组和生理盐水组显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)；丹参注射液组与吉粒芬动员组比较,差异无统计学意义(P>0.05),两组与生理盐水组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。2、假手术组TTC染色未发现梗死灶；按实验方案给药后,发现吉粒芬动员+丹参注射液组梗死面积较其他三组减小。3、各组大鼠双侧SVZ的Brdu+细胞数差异无统计学意义(P>0.05)；假手术组SVZ的BrdU+/nestin+细胞数低于各组,差异有统计学意义(P<0.05)；吉粒芬动员+丹参注射液组SVZ的BrdU+/nestin+细胞数较其他四组显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)；丹参注射液组与吉粒芬动员组比较,差异无统计学意义(P>0.05),两组与生理盐水比较,差异有统计学意义(P>0.05)。各组大鼠双侧脑室SVZ中,BrdU+/nestin+细胞数占BrdU+细胞数比率无统计学差异(P>0.05)；均未发现GFAP+/nestin+细胞。4、吉粒芬动员+丹参注射液组大鼠双侧SVZ区周围发现大量的BrdU+/NeuN+细胞。结论：1、大鼠脑梗死后,随着时间推移,大鼠的神经功能有改善；单独应用rhG-CSF或丹参注射液能促进大鼠的神经功能改善,rhG-CSF联合应用丹参注射液能显著改善大鼠的神经功能。2、大鼠脑梗死后,在应激条件下可以使侧脑室SVZ的NSCs增殖。3、单独应用rhG-CSF或丹参注射液能促进急性脑梗死大鼠双侧侧脑室SVZ的NSCs增殖,联合用药可进一步促进SVZ的NSCs增殖,并促使更多的NSCs向神经元分化。

全文目录


英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-11
引言  11-13
第一部分 实验部分  13-22
  1 材料与方法  13-14
    1.1 实验动物  13
    1.2 药物和试剂  13-14
    1.3 主要仪器  14
  2 实验方法  14-22
    2.1 动物准备与模型制作  14-15
      2.1.1 术前准备  14
      2.1.2 局灶性脑梗死模型建立  14-15
      2.1.3 纳入模型标准  15
    2.2 实验动物分组  15-16
    2.3 治疗方法  16-17
    2.4 一般资料比较  17
    2.5 神经功能缺损评定  17-18
    2.6 TTC染色  18
    2.7 BrdU注射及冰冻切片制作  18-19
    2.8 免疫荧光染色  19-20
    2.9 免疫荧光结果分析  20
    2.10 统计学分析  20-22
第二部分 结果  22-32
  3.1 行为学结果评定  22-24
  3.3 脑梗死大鼠双侧SVZ的BrdU表达  24-28
  3.4 rhG-CSF联合丹参注射液对大鼠缺血脑损伤SVZ的NSCs增殖的影响  28-30
  3.5 丹参注射液促进NSCs向神经元分化  30
  3.6 rhG-CSF联合丹参注射液促进NSCs向神经元分化  30-32
第三部分 分析与讨论  32-40
  4.1 脑梗死目前治疗方法  32-33
  4.2 丹参注射液治疗脑梗死  33-34
  4.3 成年哺乳动物大脑SVZ的细胞增殖  34-35
  4.4 SVZ增殖的细胞的特性  35-36
  4.5 缺血后CNS的自我更新能力  36-37
  4.6 rhG-CSF动员骨髓干细胞并诱导干细胞归巢  37-38
  4.7 丹参注射液促进脑梗死后SVZ的NSCs增殖  38-39
  4.8 丹参注射液促进NSCs向神经元分化  39
  4.9 问题与展望  39-40
致谢  40-41
参考文献  41-47
附录A：综述：丹参注射液单体治疗脑卒中的研究进展  47-60
  参考文献  56-60
附录B：攻读学位期间发表的论文、科研、交流学习情况  60-62
附表  62-66

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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