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桂皮醛对人乳腺癌MDA-MB-435S细胞侵袭转移的影响及其分子机制

作　者: 王歌
导　师: 王瑞平
学　校: 南京中医药大学
专　业: 中医内科学
关键词: 桂皮醛乳腺癌人乳腺癌MDA-MB-435S细胞 miR-27a JAK/STAT3信号通路
分类号: R273
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：本研究旨在探讨桂皮醛对人乳腺癌MDA-MB-435S细胞侵袭转移的影响及其分子机制。方法：①采用MTT法,观察桂皮醛对人乳腺癌MDA-MB-435S细胞增殖的影响及其与药物浓度和作用时间的关系；②采用纤维连接蛋白FN胶及MTT法,观察桂皮醛预处理的MDA-MB-435S细胞黏附能力的改变；③利用Transwell小室模型观察桂皮醛对MDA-MB-435S细胞侵袭能力的影响；④采用脂质体2000转染miR-27a模拟物/抑制物联合RT-PCR及transwell小室模型法探讨miR-27a的表达在MDA-MB-435S细胞侵袭中的作用和桂皮醛对MDA-MB-435S细胞miR-27a表达的干预及其与影响细胞侵袭能力的关系；⑤采用western blot法检测桂皮醛对MDA-MB-435S细胞E-cad、RhoC、 stat3及p-stat3分子表达的干预。结果：①5～80μg/ml浓度的桂皮醛作用人乳腺癌MDA-MB-435S细胞24、48及72h后对其增殖均有显著的抑制作用(P<0.01),并呈浓度和时间依赖性,抑制率最高达81.42%；24、48及72h组的半数抑制浓度(IC50)分别为29.77、6.60.6.90μg/ml。②20、40、80μg/ml浓度的桂皮醛对MDA-MB-435S细胞的黏附能力均有显著的抑制作用(P<0.05),抑制率最高达79.41%,呈现浓度依赖性；80μg/ml浓度组的抑制率在30～120min有递增趋势,而20、40μg/ml浓度组的抑制率在30～120min未呈现递增趋势。③20、40、80μg/ml浓度的桂皮醛作用MDA-MB-435S细胞12h后,穿过transwell小室的细胞数量均较对照组显著减少(P<0.05),侵袭抑制率呈现浓度依赖性,且40、80μg/ml浓度组穿过transwell小室的细胞形态发生了改变。④miR-27a模拟物和抑制物转染后的MDA-MB-435S细胞miR-27a表达量分别是对照组的962.07倍和40%；经miR-27a抑制物转染后的MDA-MB-435S细胞穿过transwell小室的细胞数量显著下降(P<0.05)；20、40、80μg/ml桂皮醛作用MDA-MB-435S细胞12h后均可下调其miR-27a的表达量(2-ΔΔCt分别为0.56、0.18和0.18);miR-27a模拟物转染预处理后经桂皮醛作用12h的MDA-MB-435S细胞穿过小室的数量较对照物预处理联合相同浓度桂皮醛组显著增多(P<0.05)。⑤20、40、80μg/ml浓度的桂皮醛作用MDA-MB-435S细胞24h后均可使其表达的E-cad蛋白灰度增加,并呈现浓度依赖趋势；三组浓度均可使细胞RhoC蛋白灰度降低,呈现浓度依赖趋势；20、40μg/ml浓度组的stat3蛋白灰度无明显变化,但80μg/ml浓度组的stat3蛋白灰度降低；三组浓度均可使细胞p-stat3蛋白灰度降低,80μg/ml浓度组最明显。结论：桂皮醛通过抑制人乳腺癌MDA-MB-435S细胞的增殖、黏附和侵袭能力而发挥抑制乳腺癌侵袭转移作用,其中桂皮醛抑制MDA-MB-435S细胞的侵袭能力与下调其miR-27a的表达有关,不同浓度的桂皮醛对MDA-MB-435S细胞的影响可能是通过调节E-cad、RhoC、stat3和p-stat3这些分子实现的。

全文目录

目录  5-7
摘要  7-9
Abstract  9-11
前言  11-12
第一章研究背景  12-22
  1 中医药防治乳腺癌转移的研究概况  12-16
    1.1 病因病机  12-13
    1.2 现代研究  13-16
    1.3 总结  16
  2 温阳法在乳腺癌等恶性肿瘤治疗中的地位  16-18
    2.1 阳虚是乳腺癌等恶性肿瘤的重要病机  16-17
    2.2 温阳法治疗乳腺癌等恶性肿瘤的研究概况  17-18
    2.3 展望  18
  3 桂皮醛抗肿瘤机制的研究进展  18-22
    3.1 防癌抗突变  18-19
    3.2 抑制肿瘤细胞增殖  19
    3.3 诱导肿痈细胞凋亡  19-20
    3.4 抗肿瘤耐药  20
    3.5 增强免疫以抗癌  20
    3.6 讨论  20-22
第二章实验研究  22-51
  1 桂皮醛对人乳腺癌MDA-MB-435S细胞增殖的抑制作用  22-26
    1.1 实验材料  22-23
    1.2 方法与步骤  23-24
    1.3 结果  24-25
    1.4 讨论  25-26
  2 桂皮醛对人乳腺癌MDA-MB-435S细胞体外黏附的抑制作用  26-30
    2.1 实验材料  26-27
    2.2 方法与步骤  27-28
    2.3 结果  28-29
    2.4 讨论  29-30
  3 桂皮醛对人乳腺癌MDA-MB-435S细胞体外侵袭能力的抑制作用  30-34
    3.1 实验材料  30-31
    3.2 方法与步骤  31-32
    3.3 结果  32-33
    3.4 讨论  33-34
  4 桂皮醛抑制MDA-MB-435S细胞侵袭性与调节miR-27a表达关系的探讨  34-44
    4.1 实验材料  34-35
    4.2 方法与步骤  35-38
    4.3 结果  38-42
    4.4 讨论  42-44
  5 桂皮醛对MDA-MB-435S细胞E-cad、RhoC、stat3及p-stat3分子表达的干预  44-51
    5.1 实验材料  44-46
    5.2 方法与步骤  46-48
    5.3 结果  48-49
    5.4 讨论  49-51
第三章讨论  51-55
  1 中药抗乳腺癌转移作用的研究思路与方法概述  51-53
    1.1 按实验类型可分为体内实验与体外实验  51
    1.2 按中药类型可分为复方、单味中药制剂及中药单体成分  51-52
    1.3 按研究思路的来源可分为中医药理论和既往研究成果  52
    1.4 按研究目的可分为验证与诠释和开发新药  52-53
  2 桂皮醛抑制人乳腺癌MDA-MB-435S细胞侵袭转移的作用及其机制  53-54
    2.1 桂皮醛对MDA-MB-435S细胞增殖的抑制作用  53
    2.2 桂皮醛对MDA-MB-435S细胞黏附的抑制作用  53
    2.3 桂皮醛对MDA-MB-435S细胞侵袭能力的抑制作用  53
    2.4 桂皮醛抑制MDA-MB-435S细胞的侵袭能力与调节miR-27a的关系  53-54
    2.5 桂皮醛对MDA-MB-435S细胞E-cad、RhoC、stat3及p-stat3分子表达的干预  54
  3 本研究的创新点及意义  54
  4 问题与展望  54-55
第四章结语  55-56
参考文献  56-60
附录1 部分英文缩写语的中英文对照  60-61
附录2 攻读硕士学位期间取得的学术成果  61-62
致谢  62

桂皮醛对人乳腺癌MDA-MB-435S细胞侵袭转移的影响及其分子机制

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