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犬H5N2亚型流感病毒的致病和传播特性实验研究

作　者: 宋倩倩
导　师: 谢之景
学　校: 山东农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 犬H5N2亚型流感病毒致病特性传播特性
分类号: S858.292
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

一直以来人们并不认为流感病毒可以感染犬和猫。然而，这种结论很快被推翻。人们先后分离到犬流感病毒H3N8, H3N2,H5N1以及H1N1。并且大多数的H5N2亚型流感病毒都是从禽类中分离到的，很少从哺乳动物中分离到。2009年我实验室分离到一株A/canine/Shandong/JT01/2009（H5N2）毒株简称CA/SD/JT01/09(H5N2),但是对于其致病性和传播性尚不清楚。因此我们通过以犬、小白鼠和鸡作为实验动物模型，进行其致病性和传播性研究。在致病性实验中，我们发现Dp1组接种犬中有5只在接种后3-6天表现出了类似流感样临床症状；6只在接种后2-3天体温升高，之后体温恢复正常。7、14、21天犬血清检测发现，Dp1组接种犬的血清全部呈阳性。所有实验动物的直肠拭子中未出现排毒情况，而Dp1组接种犬的鼻拭子洗脱液在1-5天呈阳性。之后采取RT-PCR的方法对血凝阳性的鼻拭子样品进行病毒检测，发现检测到的病毒与原病毒一致。另外，我们对1只接种犬和1只对照犬进行剖检取样，用RT-PCR的方法从接种犬的鼻、气管和肺脏组织中分离到流感病毒，而且该流感病毒与原病毒一致，而对照犬中却没有分离到病毒。与犬不同的是， Mp1组接种的小白鼠没有表现出临床症状，但是14天时抗体呈阳性，21天抗体消失。Mp2组对照组未表现任何临床症状，抗体为阴性。在鸡的动物模型实验中，Cp1组接种鸡表现出了较明显的流感样临床症状，对发病鸡进行剖检时，发现部分鸡出现了明显的流感病毒剖检变化。Cp2组对照组鸡无临床症状。病理组织学检查发现，在鸡的十二指肠、脾脏、肺、法氏囊、肝脏、肾脏、胰腺、心脏等器官内都产生了病变等。通过RT-PCR的方法对上述器官进行病毒分离鉴定，结果显示都检测到了病毒，且与原病毒一致。在传播性实验中，结果发现Dt1组哨兵犬中有4只在与Ds1组接种犬同居5-7天后，表现出了流感样临床症状，5只犬在4-5天时体温升高，接着很快恢复正常，另外在14天与21天时从所有哨兵犬体内检测到了流感抗体。通过RT-PCR的方法在同居后3-6天从6只哨兵犬的鼻拭子中分离到该病毒，并且发现该流感病毒与原病毒一致。在同居后4天，我们通过RT-PCR的方法，从1只哨兵犬的鼻、气管和肺脏中成功分离到并确定了该病毒与原病毒一致。与致病性实验一样，5只哨兵鼠并没有表现出任何临床症状，但是14天时抗体阳性，而到21天时血清抗体呈阴性。通过实验发现，哨兵鸡的临床症状与病理组织学检查与致病性实验中接种鸡相同，通过RT-PCR方法检测也确定该病毒与与原病毒一致的病毒。综上结果表明，该流感病毒能够感染犬、鸡和小白鼠，也能够在种属间和种属内进行传播，虽然其致病性较弱，不能造成易感动物的死亡，但是作为易感动物的犬，极有可能作为中间宿主为病毒传染给人提供一种可能。

全文目录

中文摘要  7-9
Abstract  9-11
1 前言  11-27
  1.1 犬流感病毒的病原学特征  12-13
  1.2 犬流感病毒的进化途径  13
  1.3 犬流感病毒的特性  13-14
    1.3.1 犬流感病毒的理化特性  13-14
    1.3.2 犬流感病毒的血凝特性  14
    1.3.3 犬流感病毒的增值特性  14
  1.4 犬流感病毒的流行状况  14-15
  1.5 犬流感病毒的宿主谱和地理分布  15-17
    1.5.1 犬流感病毒的宿主谱  15-16
    1.5.2 犬流感病毒的地理分布  16-17
  1.6 犬流感病毒的传播机制和潜伏期  17-18
    1.6.1 犬流感病毒的传播机制  17-18
    1.6.2 犬流感病毒的潜伏期  18
  1.7 犬流感病毒的症状  18-21
    1.7.1 犬流感病毒的临床症状  18-19
    1.7.2 犬流感病毒的剖检症状  19
    1.7.3 犬流感病毒的发病率和死亡率  19-21
  1.8 犬流感病毒的诊断  21-24
    1.8.1 临床诊断  21
    1.8.2 鉴别诊断  21
    1.8.3 实验室诊断  21-24
  1.9 流感病毒的治疗  24-27
    1.9.1 流感病毒的预防  24
    1.9.2 疑似犬流感病例应采取的措施  24-25
    1.9.3 公共卫生学意义  25-27
2 材料与方法  27-38
  2.1 材料  27
  2.2 试剂  27
  2.3 主要仪器  27-28
  2.4 试剂的配制  28-29
    2.4.1 阿氏液的配制  28
    2.4.2 1%鸡红细胞悬液的配制  28
    2.4.3 PBS 的制备  28
    2.4.4 4%多聚甲醛  28
    2.4.5 1N NaOH  28-29
  2.5 试验方法  29-38
    2.5.1 动物实验模型的建立  29
    2.5.2 临床症状观察  29
    2.5.3 血清学检测  29-31
    2.5.4 排毒情况检测  31-35
    2.5.5 病理组织学检测  35-36
    2.5.6 病毒在动物内脏器官的分布情况检测  36-38
3 结果  38-51
  3.1 病毒增殖培养  38
  3.2 致病性实验研究结果  38-47
    3.2.1 临床症状检测  38-40
    3.2.2 血清学检测  40-41
    3.2.3 排毒情况检测  41-43
    3.2.4 病理组织学检测  43-47
  3.3 传播特性研究结果  47-51
    3.3.1 临床症状检测  47
    3.3.2 血清学检测  47-48
    3.3.3 排毒情况检测  48-50
    3.3.4 病理组织学检测  50-51
4.讨论  51-55
5 结论  55-56
参考文献  56-64
攻读学位期间发表论文情况  64

犬H5N2亚型流感病毒的致病和传播特性实验研究

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