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育成鸡新城疫的综合诊断及发病原因分析

作　者: 王月华
导　师: 刘思当
学　校: 山东农业大学
专　业: 基础兽医
关键词: 新城疫病毒血清中和试验 TCID50 PCR鉴定病理组织学鉴定
分类号: S858.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 24次
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内容摘要

城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）引起的以感染禽类为主的一种急性、烈性传染病。新城疫是严重危害我国和世界养禽业的主要病毒性传染病之一。随着疫苗的强化免疫，新城疫在一定程度上得到了控制，但在免疫选择压的作用下，NDV的毒力有增强的趋势，使免疫鸡群仍有发病。某饲养规模为10000只的育成蛋鸡群，40日龄时突然发生以精神沉郁、采食下降、呼吸困难、排黄绿色稀粪为主要特征的疾病。发病后死亡率迅速上升，高峰期每天死亡达400多只，疑似鸡新城疫，我们对该病例进行了综合诊断，并对其发病原因进行了调查分析。结果表明：剖检腺胃乳头出血，十二指肠末端、空肠中部、回肠起始部淋巴滤泡处黏膜肿胀、充血、出血、溃疡，盲肠扁桃体肿胀、出血，直肠黏膜点状出血；呼吸道黏膜出血性卡他性炎症。组织病理学检测，脑膜充血、出血，血管周围淋巴细胞浸润形成袖套现象，胶质细胞结节状及弥漫性增生；脾脏淋巴细胞灶状坏死；肠道黏膜上皮细胞坏死脱落，固有层充血、出血、水肿，淋巴滤泡坏死；气管黏膜上皮细胞坏死脱落，黏膜固有层充血、出血、有大量的淋巴细胞浸润，呈出血性卡他性炎症病变。发病后15天时检测发病鸡群新城疫抗体水平显著上升，平均效价达7个滴度，为发病初的2.22倍，7个滴度以上的占60%，10%超过11个滴度。从发病育成鸡的气管和肺中分离到一株病毒。该病毒能凝集鸡的红细胞，能适应鸡胚成纤维细胞（CEF），引起典型的细胞病变，其在CEF中的毒价可达10-4.8/0.1mL。根据Genbank中登录的新城疫病毒基因组序列的保守区设计合成一对引物，通过PCR技术扩增得到大小约700bp的目的条带。经过流行病学调查、症状观察、剖检病变、病理组织学检测及病原学检测，综合分析该病例为强毒新城疫病毒感染所致典型新城疫。该研究还对该病例的发病原因进行了调查分析。

全文目录

符号说明  4-10
中文摘要  10-11
Abstract  11-13
前言  13-30
  1 发病历史  13-15
  2 病毒的生物学特性  15-18
    2.1 形态学  15
    2.2 化学组成  15
    2.3 生物学特性  15-18
      2.3.1 血凝活性  15-16
      2.3.2 细胞融合和溶血  16
      2.3.3 病毒复制  16
      2.3.4 对理化因素的抵抗力  16
      2.3.5 毒株分类  16-17
      2.3.6 致病性  17
      2.3.7 致病性的分子基础  17-18
  3 流行病学  18-19
    3.1 发生与分布  18
    3.2 自然宿主和实验宿主  18
    3.3 传播  18-19
    3.4 潜伏期  19
  4 临床症状  19-21
  5 剖检变化  21-22
  6 病理变化  22-23
  7 诊断  23-28
    7.1 病毒分离  23-24
      7.1.1 鸡胚  23-24
      7.1.2 细胞培养  24
    7.2 血清学诊断方法  24-25
      7.2.1 血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）  24-25
      7.2.2 荧光抗体技术（FA）  25
    7.3 RT-PCR  25-26
    7.4 酶联免疫吸附试验（ELISA）  26
    7.5 琼脂扩散试验（AGP）  26-27
    7.6 乳胶凝集试验（LAT）  27
    7.7 协同凝集试验  27-28
  8 鉴别诊断  28
    8.1 不同血清型之间的鉴别诊断  28
    8.2 在实际工作中的鉴别诊断，应注意与霍乱和住白细胞原虫病的鉴别诊断  28
  9 防制  28-30
    9.1 加强卫生管理，防止病原体侵入鸡群  28-29
    9.2 定期预防接种，增强鸡群的特异免疫力  29-30
  10 治疗  30
  11 本研究的目的意义  30
2 材料与方法  30-36
  2.1 材料  30-31
  2.2 方法  31-36
    2.2.1 发病情况调查及症状观察  31
    2.2.2 病理剖检  31
    2.2.3 病理组织学检查  31-32
      2.2.3.1 取材  31
      2.2.3.2 固定  31
      2.2.3.3 修切和冲水  31
      2.2.3.4 脱水  31-32
      2.2.3.5 透明与浸蜡  32
      2.2.3.6 包埋  32
      2.2.3.7 切片  32
      2.2.3.8 展片和粘片  32
      2.2.3.9 烤片  32
      2.2.3.10 HE 染色  32
      2.2.3.11 封片  32
    2.2.4 抗体检测  32
    2.2.5 病原分离  32-33
      2.2.5.1 病料处理  32
      2.2.5.2 鸡胚接种  32
      2.2.5.3 细胞接种  32-33
        2.2.5.3.1 鸡胚成纤维的培养  32-33
        2.2.5.3.2 接毒  33
    2.2.6 血清中和试验  33
    2.2.7 细胞培养半数感染量（TCID50）的测定  33
    2.2.8 PCR 鉴定  33-35
      2.2.8.1 病毒 RNA 的提取  33-34
      2.2.8.2 RT- PCR 扩增  34-35
      2.2.8.3 PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳  35
    2.2.9 测序及遗传进化分析  35-36
      2.2.9.1 PCR 产物的回收  35
      2.2.9.2 DNA 的连接  35
      2.2.9.3 感受态大肠杆菌 DH5a 的制备  35
      2.2.9.4 转化  35-36
      2.2.9.5 质粒 DNA 的提取  36
      2.2.9.6 测序分析  36
3 结果与分析  36-47
  3.1 发病情况调查及临床症状观察  36-37
  3.2 剖检病变  37-39
  3.3 病理组织学诊断  39-43
  3.4 抗体检测  43-44
  3.5 病毒分离  44
  3.6 血清中和试验  44
  3.7 CEF 细胞接种  44
  3.8 TCID50 的测定  44-45
  3.9 PCR 鉴定  45
  3.10 遗传进化分析  45-47
4 讨论  47-49
5 结论  49-50
参考文献  50-55
致谢  55

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