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对转FABP基因小鼠脂肪沉积及生长发育指标的研究

作　者: 樊晗璐
导　师: 郭宏
学　校: 天津农学院
专　业: 预防兽医学
关键词: 转基因小鼠 A-FABP 脂肪沉积 生化指标 基因表达量
分类号: S813
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要


本研究通过构建转A-FABP基因小鼠模型，来测定A-FABP基因在小鼠体内表达量,检测A-FABP基因对小鼠各组织内脂肪沉积量以及对其他功能基因组的影响。通过转基因小鼠与野生型小鼠之间的比较，来研究FABP基因对小鼠脂肪沉积及生长发育指标的影响，为今后转基因动物的建立提供科学依据。本实验首先构建了牛A-FABP基因超表达载体并将这个载体转入小鼠体内。超表达载体是对载体pEGFP-c1进行HindIII/BamHI双酶切，在酶切位点处插入优化过的牛的A-FABP基因，处理后的载体经线性化后通过原核显微注射技术导入FVB小鼠受精卵内，从而得到转A-FABP基因小鼠。在得到转A-FABP基因小鼠模型后通过对小鼠亲代及其后代F1、F2、F3代小鼠生长发育指标、血清生化指标、傅里叶红外光谱分析、转基因小鼠组织切片、A-FABP蛋白含量、A-FABP基因表达量等方面的测定来验证A-FABP基因的功能特性。本实验结果表明：1.根据对转A-FABP基因小鼠DNA和RNA水平的检测以及基因表达量的检测结果可以看出FBAP基因在小鼠体内能够稳定表达；2.根据对转FABP基因小鼠生长发育指标的检测，可以看出A-FABP基因不会影响小鼠正常的生长发育和繁殖；3.从对小鼠体内甘油三酯含量的检测可以看出A-FABP基因能够促进小鼠组织内脂肪的沉积、增加小鼠体内脂肪的含量。结论：A-FABP基因能够增加小鼠体内脂肪的沉积，并且能够在小鼠体内稳定的表达和遗传而不引起其他功能基因组的变化，为转基因动物的建立提供了科学依据。

全文目录


摘要  9-10
Abstract  10-11
第一章 引言  11-21
  1.动物转基因技术的研究进展  11-16
    1.1 主要的动物转基因技术研究进展  11-13
      1.1.1 显微注射技术  11-12
      1.1.2 精子载体法  12
      1.1.3 逆转录病毒载体法  12-13
      1.1.4 体细胞核移植法  13
    1.2 动物转基因技术的应用现状  13-16
      1.2.1 生物制药  13-14
      1.2.2 动物模型  14-15
      1.2.3 器官移植  15
      1.2.4 培育优良品种  15-16
  2.FABP 基因的研究进展  16-19
    2.1 FABP 基因概况  16-17
    2.2 FABP 基因的定位、结构以及蛋白质特性  17
    2.3 A-FABP 基因的功能  17-19
      2.3.1 A-FABP 与脂类代谢的关系  17-18
      2.3.2 A-FABP 与代谢综合征的关系  18
      2.3.3 A-FABP 与二型糖尿病的关系  18
      2.3.4 A-FABP 与炎症的关系  18-19
  3.关于转入基因的检测与评价方法  19
    3.1 组织样化学组成的检测  19
    3.2 转基因小鼠组织样的显微结构分析  19
  4.本研究的目的及意义  19-21
第二章 FABP 转基因小鼠模型的建立及鉴定  21-32
  1.实验材料和方法  21-26
    1.1 实验材料  21-22
      1.1.1 主要试剂  21
      1.1.2 序列合成  21
      1.1.3 主要仪器和设备  21-22
      1.1.4 实验动物  22
    1.2 方法  22-26
      1.2.1 转 FABP 基因小鼠模型的建立  22-23
      1.2.2 转 FABP 基因小鼠 DNA 水平的鉴定  23-24
      1.2.3 转 FABP 基因小鼠 RNA 水平的鉴定  24-25
      1.2.4 转基因小鼠繁殖性能的检测  25-26
      1.2.5 转 FABP 基因小鼠内 FABP 基因定量  26
  2.结果与讨论  26-32
    2.1 转基因小鼠的鉴定  26-28
    2.2 转基因小鼠繁殖性能的检测  28-29
    2.3 转基因小鼠 FABP 基因表达量的检测  29-31
    2.4 讨论  31-32
第三章 生长发育指标的检测  32-46
  1.实验材料和方法  32-34
    1.1 实验材料  32-33
      1.1.1 主要试剂  32
      1.1.2 主要仪器和设备  32
      1.1.3 实验动物  32-33
    1.2 实验方法  33-34
      1.2.1 生长发育、繁殖指标和生化指标的测定  33
      1.2.2 组织样化学成分的分析  33
      1.2.3 转基因小鼠组织样的显微结构分析  33-34
  2.结果与讨论  34-46
    2.1 结果  34-44
      2.1.1 转基因小鼠的生长繁殖情况的测定  34
      2.1.2 小鼠体重的测量及腹脂率的测量  34-35
      2.1.3 小鼠生化指标的测量  35
      2.1.4 转基因小鼠组织样的显微结构分析  35-39
      2.1.5 组织样化学成分分析  39-44
    2.4 讨论  44-46
第四章 A-FABP 基因对小鼠体内脂肪沉积的影响  46-50
  1.实验材料和方法  46-47
    1.1 实验材料  46
      1.1.1 主要试剂  46
      1.1.2 主要仪器和设备  46
      1.1.3 实验动物  46
    1.2 实验方法  46-47
      1.2.1 FABP 蛋白的检定  46-47
      1.2.2 甘油三酯的测定  47
  2.结果与讨论  47-50
    2.1 结果  47-49
      2.1.1 FABP 蛋白含量的测定  47-48
      2.1.7 小鼠甘油三酯含量的测量  48-49
    2.2 讨论  49-50
第五章 结论  50-52
  1.牛 A-FABP 基因超表达载体的构建及转 A-FABP 基因小鼠模型的建立  50
  2.对转 A-FABP 基因小鼠生长发育指标和生化指标的测定  50
  3.对转 A-FABP 基因小鼠傅里叶红外光谱的检测  50
  4.对转 A-FABP 基因小鼠脂肪沉积的检测  50
  5.转 A-FABP 基因小鼠遗传稳定性的研究  50-52
参考文献  52-56
附录  56

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 普通畜牧学 > 畜禽遗传、选种、育种
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