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水稻品种魔王谷持久抗稻瘟病基因Pi49的精细定位

作　者: 郑卓之
导　师: 戴良英
学　校: 湖南农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 魔王谷 稻瘟病 Pi49 精细定位 BAC克隆
分类号: S435.111.41
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


稻瘟病严重影响水稻生产,是由子囊菌Magnaporthe oryzae引起的一种真菌性病害。传统的化学防治方法容易带来安全、环保、经济性等方面的问题。利用稻瘟病抗性基因培育水稻抗稻瘟病品种是目前最有效、最经济的稻瘟病防治方法。水稻主效抗稻瘟病基因的定位和克隆将为培育水稻稻瘟病抗病品种提供优良基因资源,对理解水稻和稻瘟病菌分子互作机理解析具有重要作用。魔王谷是云南省的一个地方粳稻品种,长期的研究和田间种植证明其具有广谱、持久的稻瘟病抗性。本实验室利用魔王谷与感病籼稻品种C039杂交构建重组自交系F8和F9,通过QTL分析初步定位了一个位于11号染色体的主效抗稻瘟病基因。在此基础上我们对该基因进行了精细定位,并命名为Pi49,并进行了BAC文库筛选,主要结果如下：1.利用208株感病单株将Pi49初步定位于SSR标记RM224与RM144之间。2.通过再开发位于标记RM224与RM144之间分子标记,最终将Pi49定位于CAPS标记K27与SSR标记K10之间,Pi49与这两个分子标记的遗传距离都是0.16cM与0.16cM.3.构建了魔王谷的BAC文库,并用目的基因两侧的标记K10和K134,通过富集PCR筛选的方法对该BAC文库进行了筛选,得到了含有目的基因片段的单克隆。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-8
第一章 绪论  8-17
  1 植物抗病基因的定位与克隆  9-11
    1.1 植物抗病基因定位的基本策略  9-10
      1.1.1 主效抗病基因的定位方法与基本原理  9-10
      1.1.2 数量性状抗病基因定位策略  10
    1.2 植物抗病基因克隆主要策略  10-11
      1.2.1 图位克隆法  10-11
      1.2.2 转座子标签克隆法  11
      1.2.3 基于基因差异表达克隆法  11
      1.2.4 基于同源序列克隆法  11
  2 水稻抗稻瘟病基因的克隆与结构特点  11-13
    2.1 水稻抗稻瘟病基因的克隆  11-12
    2.2 水稻抗稻瘟病基因的结构特点  12-13
  3 稻痕病菌Avr基因的鉴定和克隆  13-14
  4 水稻抗稻瘟病基因与稻瘟病菌AVR基因的互作机制  14-16
  5 选题依据及研究意义  16-17
第二章 抗稻瘟病基因Pi49的精细定位  17-27
  1 材料与方法  17-21
    1.1 供试材料  17
    1.2 方法  17-21
      1.2.1 F2作图群体构建  17
      1.2.2 稻瘟病菌培养与分生孢子悬浮液的制备  17-18
      1.2.3 接种与病情调查  18-19
      1.2.4 水稻基因组DNA的提取  19-20
      1.2.5 PCR和电泳  20-21
      1.2.6 连锁图谱与物理图的构建  21
      1.2.7 目标区域基因预测  21
  2 结果与分析  21-25
    2.1 稻瘟病菌小种的选择  21
    2.2 分子标记的选择与开发  21-22
    2.3 Pi49的精细定位  22-25
      2.3.1 Pi49基本区间的确定  22-23
      2.3.2 Pi49的精细定位  23-24
      2.3.3 魔王谷/CO39 F_3代验证重组子  24-25
      2.3.4 遗传图谱与物理图谱的整合及基因预测  25
  3 讨论  25-27
第三章 魔王谷BAC文库的构建和筛选  27-32
  1 材料与方法  27-30
    1.1 供试材料  27
    1.2 LB培养基的配置  27-28
    1.3 质粒的提取方法  28
    1.4 琼脂糖电泳检测  28-29
    1.5 BAC克隆混合池的构建和PCR筛选  29-30
  2 结果与分析  30-31
  3 讨论  31-32
第四章 结论与讨论  32-33
参考文献  33-39
致谢  39-41
作者简历  41

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 农作物病虫害及其防治 > 禾谷类作物病虫害 > 稻病虫害 > 病害 > 侵（传）染性病害 > 稻瘟病
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