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蒜氨酸分离纯化工艺及抗氧化活性研究

作　者: 鲁蕾
导　师: 张民
学　校: 天津科技大学
专　业: 食品科学
关键词: 蒜氨酸醇沉法大孔吸附树脂葡聚糖凝胶G-10 体内抗氧化
分类号: TS255.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

大蒜是一种历史悠久的药食两用植物,蒜氨酸是大蒜中主要的生物活性物质前体,经研究证实,以蒜氨酸为代表的含硫氨基酸具有独特的药理活性。本文以大蒜为原料,采用醇沉法、吸附色谱法及凝胶色谱法研究了蒜氨酸的分离纯化工艺,旨在建立一种新的蒜氨酸的分离纯化工艺技术,并通过动物实验研究了蒜氨酸及其热处理样品的体内抗氧化活性,为蒜氨酸的深入研究和加工利用提供前期技术准备。经研究确定醇沉法分离蒜氨酸的最佳工艺条件为：大蒜提取液真空浓缩至可溶性固形物含量为20%,加入乙醇至终浓度为80%,室温静置18h,分离得上清液及沉淀,再将所得上清液及沉淀复溶液按上述条件分别进行醇沉,得二次醇沉上清液,合并,冷冻干燥,得蒜氨酸粗品,纯度为20.6%,经测定蒜氨酸的保留率为87.6%,总糖沉淀率为69.1%,蛋白沉淀率为93.7%。采用不同极性的大孔吸附树脂为吸附材料,通过动态吸附色谱法研究其对蒜氨酸及多糖的分离效果。经过测定可知大孔吸附树脂S-8、HPD-400、HPD-600、ADS-17及聚酰胺树脂对蒜氨酸及多糖均无分离效果,所以通过吸附色谱并不能达到分离纯化蒜氨酸的目的。采用Sephadex G-10色谱法分离纯化蒜氨酸,研究了不同上样浓度及不同上样量条件下,大蒜多糖与蒜氨酸的分离效果,确定最佳条件为：脱气蒸馏水为洗脱剂,上样液浓度为0.30g/mL,上样量为2%柱体积,洗脱流速1mL/min,通过Sephadex G-10分离后,蒜氨酸的纯度可达到49.4%。采用D-半乳糖衰老模型小鼠,研究了蒜氨酸及其热处理样品的体内氧化作用,结果表明：蒜氨酸及其热处理样品对各组小鼠体重及各脏器指数均无显著性影响,对小鼠的生长发育无不良影响。蒜氨酸及其热处理样品灌胃量在5mg/kg bw·d～20mg/kg bw·d范围内可以提高小鼠组织及血清的SOD活力,抑制小鼠组织及血清MDA含量的增加,提高小鼠组织CAT活力及GSH-Px活力,从而增强机体的抗氧化机能,延缓衰老。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-9
1 前言  9-21
  1.1 蒜氨酸概述  9-13
    1.1.1 蒜氨酸的发现  9
    1.1.2 蒜氨酸检测方法研究进展  9-10
    1.1.3 蒜氨酸制备方法研究进展  10-11
    1.1.4 蒜氨酸的结构和物理性质  11
    1.1.5 蒜氨酸的药理活性  11-13
  1.2 蒜氨酸分离纯化工艺研究  13-19
    1.2.1 水提醇沉法概述  13-17
    1.2.2 吸附色谱法概述  17-19
    1.2.3 凝胶色谱法概述  19
  1.3 课题研究目的、意义及内容  19-21
    1.3.1 研究的目的和意义  19-20
    1.3.2 研究的主要内容  20-21
2 材料与方法  21-30
  2.1 实验原料  21
  2.2 主要仪器  21-22
  2.3 主要试剂  22
  2.4 实验方法  22-30
    2.4.1 蒜氨酸提取液的制备  22
    2.4.2 醇沉法分离蒜氨酸工艺条件的研究  22-24
    2.4.3 吸附色谱法分离纯化蒜氨酸工艺条件的研究  24-26
    2.4.4 凝胶色谱法分离纯化蒜氨酸工艺条件的研究  26-27
    2.4.5 蒜氨酸的体内抗氧化活性研究  27-30
3 结果与讨论  30-60
  3.1 醇沉法分离蒜氨酸工艺条件的研究  30-34
    3.1.1 标准曲线的绘制  30-31
    3.1.2 蒜液浓度对醇沉效果的影响  31
    3.1.3 乙醇终浓度对醇沉效果的影响  31-32
    3.1.4 温度对醇沉效果的影响  32
    3.1.5 醇沉静置时间对醇沉效果的影响  32-33
    3.1.6 醇沉次数对醇沉效果的影响  33-34
  3.2 吸附色谱法分离纯化蒜氨酸工艺条件的研究  34-42
    3.2.1 聚酰胺树脂柱色谱法分离蒜氨酸实验研究  34-36
    3.2.2 S-8大孔吸附树脂柱色谱法分离蒜氨酸实验研究  36-37
    3.2.3 HPD-400大孔吸附树脂柱色谱法分离蒜氨酸实验研究  37-39
    3.2.4 HPD-600大孔吸附树脂柱色谱法分离蒜氨酸实验研究  39-40
    3.2.5 ADS-17大孔吸附树脂柱色谱分离蒜氨酸实验研究  40-42
  3.3 凝胶色谱法分离纯化蒜氨酸工艺条件的研究  42-45
    3.3.1 醇沉后蒜氨酸样品分子量测定  42
    3.3.2 不同上样浓度对Sephadex G-10分离纯化蒜氨酸的影响  42-44
    3.3.3 不同上样量对Sephadex G-10分离纯化蒜氨酸的影响  44-45
  3.4 蒜氨酸对D-半乳糖衰老模型小鼠抗氧化作用的研究  45-60
    3.4.1 小鼠生长情况及体重变化  45-46
    3.4.2 小鼠各脏器指数  46-48
    3.4.3 蒜氨酸对衰老模型小鼠超氧化物歧化酶(SOD)活性影响的研究  48-52
    3.4.4 蒜氨酸对衰老模型小鼠丙二醛(MDA)含量影响的研究  52-55
    3.4.5 蒜氨酸对衰老模型小鼠过氧化氢酶(CAT)活性影响的研究  55-57
    3.4.6 蒜氨酸对衰老模型小鼠谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性影响的研究  57-60
4 结论  60-62
5 展望  62-63
6 参考文献  63-69
7 论文发表情况  69-70
8 致谢  70

蒜氨酸分离纯化工艺及抗氧化活性研究

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