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基于循环放大技术细胞内小分子活性物质的检测

作　者: 付友健
导　师: 瞿斌
学　校: 青岛科技大学
专　业: 有机化学
关键词: 纳米粒子荧光电致化学发光 APS GSH 肿瘤细胞
分类号: R73-3
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

第一章,首先对肿瘤细胞的形成和检测做了介绍,对化学发光、电致化学发光、荧光进行了介绍,并对用到电致化学发光和荧光的文献进行了分析,了解了其基本原理和当前检测的趋向,并明了了当前的检测水平。第二章,我们制备了鲁米诺金胶纳米粒子(luAu NPs),由于其本身的特殊性,这种金纳米粒子具有电致化学发光、荧光等特性。由于GSH具有打断双硫键的特性,我们建立了鲁米诺金胶(luAu NPs)荧光检测体系来检测GSH的含量,并可以检测细胞内GSH含量。GSH的检测限为2.0×10-7M,并可以检测100-1000个K562细胞。第三章,以合成的鲁米诺金胶(luAu NPs)为基础,本章设计了一个基于APS增强电致化学发光循环放大检测肿瘤细胞的方法,不仅可以灵敏、特异性的响应靶细胞,还可以用于灵敏的检测靶DNA。能够快速、简便的检测电极表面一锅煮的方式产生的循环放大信号。APS能够增强鲁米诺ECL信号。优化实现条件后,可以对2.0×10-16-1.0×10-13M范围内的DNA有响应,检测限可以达到2.0×10-16M。并可以对10-1280个靶细胞进行检测,检测限可以达到10个靶细胞。在生物分析领域具有很好的应用前景。第四章,制备了氧化石墨烯(Go),并用透射电子显微镜(TEM)进行了表征。通过等温循环放大技术、以氧化石墨烯(GO)作为纳米容器来装载ssDNA和双硫键结合的DNA发卡,对GSH进行分析检测。对1.0×10-10M-I.0×10-7M的GSH具有响应,检测限可以达到1.0×10-10M,对10-1000个K562细胞进行了检测,检测限为10个K562细胞。这个方案具有高灵敏度和高特异性,并且对癌细胞中还原型生物巯基化合物的分析,具有非常重要的意义。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-9
第一章绪论  9-36
  1.1 肿瘤  9-14
    1.1.1 什么是肿瘤  9
    1.1.2 肿瘤形成的原因  9-10
    1.1.3 肿瘤标志物  10-14
  1.2 化学发光法  14-17
    1.2.1 化学发光的原理  14
    1.2.2 常见化学发光类型  14-17
  1.3 电致化学发光法  17-20
    1.3.1 电致化学发光的原理  17
    1.3.2 电致化学发光反应类型  17-20
    1.3.3 电致化学发光的前景  20
  1.4 荧光法(FL)  20-25
    1.4.1 荧光的基本原理  20-21
    1.4.2 荧光分析的两种方法  21-22
    1.4.3 荧光分析的特点  22
    1.4.4 有机化合物的荧光  22-25
  1.5 化学发光分析的应用  25-29
    1.5.1 电致化学发光检测肿瘤细胞  25-26
    1.5.2 荧光法检测GSH  26-27
    1.5.3 ECL法检测ATP  27-28
    1.5.4 滚环扩增技术下的鲁米诺-过氧化氢发光检测DNA  28-29
  1.6 立题依据  29-31
  参考文献  31-36
第二章基于荧光增强检测谷胱甘肽的研究与应用  36-44
  2.1 引言  36
  2.2 实验部分  36-38
    2.2.1 仪器与试剂  36-37
    2.2.2 实验方法  37-38
  2.3 结果与讨论  38-42
    2.3.1 设计原理  39
    2.3.2 实验中pH值得优化  39-40
    2.3.3 MB-DNA1-DNA2-luAu复合物的表征  40
    2.3.4 不同浓度GSH对应的荧光强度和工作曲线  40-41
    2.3.5 不同细胞个数破碎液得到的FL信号  41-42
  2.4 小结  42-43
  参考文献  43-44
第三章基于酶循环放大体系的增强电致化学发光细胞传感分析研究  44-60
  3.1 引言  44
  3.2 实验部分  44-47
    3.2.1 仪器与试剂  44-45
    3.2.2 实验方法  45-47
  3.3 结果与讨论  47-57
    3.3.1 设计原理  47-49
    3.3.2 表征luAu NPs  49
    3.3.3 表征金电极  49-50
    3.3.4 表征适体对细胞的特异性  50-51
    3.3.5 设计杂交链式反应DNA序列  51
    3.3.6 选择实验条件  51-53
    3.3.7 循环放大机理  53
    3.3.8 凝胶电泳成像表征循环放大反应  53-54
    3.3.9 检测靶细胞  54-55
    3.3.10 特异性  55
    3.3.11 讨论ECL增强机理  55-57
  3.4 小结  57-58
  参考文献  58-60
第四章通过氧化石墨烯纳米结构和具有二硫键的DNA镊子以及等温循环放大技术检测癌细胞中的还原型生物巯基化合物  60-72
  4.1 引言  60
  4.2 实验部分  60-63
    4.2.1 仪器与试剂  60-61
    4.2.2 实验方法  61-63
  4.3 结果与讨论  63-71
    4.3.1 设计原理  63-65
    4.3.2 表征GO  65-66
    4.3.3 凝胶电泳成像表征杂交对DNA镊子的保护  66-67
    4.3.4 未经过等温循环放大的GSH检测  67-68
    4.3.5 特异性表征  68-69
    4.3.6 加入细胞破碎液检测  69-70
    4.3.7 经过等温循环放大的GSH检测  70-71
  4.4 小结  71-72
参考文献  72-74
结论  74-75
致谢  75-76
攻读学位期间发表及待发表的学术论文目录  76-77

基于循环放大技术细胞内小分子活性物质的检测

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