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乳制品中ELISA-AFM1检测方法的建立和应用

作　者: 梁迪思
导　师: 李理
学　校: 华南理工大学
专　业: 食品工程
关键词: 酶联免疫法 黄曲霉毒素M1 乳制品
分类号: TS252.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


黄曲霉毒素是黄曲霉、寄生曲霉等产生的代谢产物，是导致人类罹患癌症的原因之一。黄曲霉毒素M1（AFM1）是动物摄入黄曲霉毒素B1B后在体内经羟基化代谢的产物，动物进食被黄曲霉毒素BB1污染的饲料后，乳中会出现AFM1，给消费者特别是婴幼儿带来严重的健康陷患。因此，各个国家和地区都对动物乳中的AFM1进行严格的限量。由于目前尚缺乏公认有效的且可供工业上大规模应用的黄曲霉毒素的预防和去除的方法，所以及时对食品中黄曲霉毒素进行定量检测是目前最大限度地降低黄曲霉毒素危害的最好措施。本文对乳制品中AFM1的酶联免疫检测方法进行了详细的研究，以期获得一种简便、准确的检测方法。建立了乳制品的ELISA-AFM1检测方法。选取配方奶粉作为方法建立的实验对象，通过对提取试剂、提取方法和净化方法的优化实验，选取80%甲醇水作为提取溶剂，90℃加热回流15min为提取方法，三氯甲烷萃取净化，最后经ELISA检测。结果提示本方法的精密度令人满意，平行结果相对偏差少于5%，向样品中分别添加0.25μg/kg、0.50μg/kg、1.0μg/kg3个浓度水平的AFM1标准品,平均回收率分别为89.9%、91.6%、90.1%，检测灵敏度0.05μg/kg。将已建立的ELISA-AFM1检测方法与标准方法进行比对。应用ELISA-AFM1检测方法、GB5413.37-2010乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定第三法免疫层析净化荧光分光度法和GB5009.24-2010食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定，分别对10个配方奶粉样品进行比对研究，结果表明三种检测方法结果间的相对偏差少于2%，无显著性差异。将ELISA-AFM1检测法应用于其它乳制品的分析。从超市随机购买配方液体乳制品、半固体乳制品和固体乳制品，每个种类三个样品，每组样品三个平行实验，结果显示相对偏差少于10%。每种样品添加0.50μg/kg AFM1标准品，回收率在88.0%～93.2%之间，令人满意。本文建立的ELISA-AFM1检测方法，检测结果与薄层色谱法、免疫层析净化荧光分光度法无显著性差异，且操作步骤简单，价格相对低廉，接触毒素浓度低，实验仪器的要求不高，可推广应用。

全文目录


摘要  5-6
Abstract  6-11
第一章 绪论  11-28
  1.1 引言  11
  1.2 我国乳制品发展状况  11-13
    1.2.1 乳制品的生产情况  11-12
    1.2.2 乳制品的安全问题  12-13
  1.3 黄曲霉毒素的危害  13-20
    1.3.1 黄曲霉毒素的产生与分类  13-14
    1.3.2 黄曲霉毒素的理化特性  14-15
    1.3.3 黄曲霉毒素的代谢与生物转化  15-16
    1.3.4 黄曲霉毒素的毒性作用  16-17
    1.3.5 饲料的黄曲霉毒素污染现状  17-18
    1.3.6 饲料中的黄曲霉毒素对牛乳的影响  18
    1.3.7 黄曲霉毒素的限量标准  18-19
    1.3.8 黄曲霉毒素M1的控制措施  19-20
  1.4 黄曲霉毒素检测方法的进展  20-27
    1.4.1 定性检测方法  20-21
    1.4.2 半定量检测方法  21
    1.4.3 定量检测法  21-26
    1.4.4 不同分析方法的比较  26-27
  1.5 本论文的立项依据和研究内容  27-28
    1.5.1 立项依据  27
    1.5.2 研究内容  27-28
第二章 配方奶粉中ELISA-AFM_1检测方法的建立  28-38
  2.1 实验准备  28-29
    2.1.1 仪器设备与材料  28-29
    2.1.2 标准溶液配制  29
  2.2 实验方法  29-32
    2.2.1 现有的ELISA样品处理方法  29
    2.2.2 样品提取方法的优化  29-31
    2.2.3 ELISA检测  31-32
  2.3 计算  32
  2.4 实验结果与讨论  32-37
    2.4.1 现有ELISA处理方法的结果  32-33
    2.4.2 样品提取方法的结果比对  33-34
    2.4.3 方法确认  34-37
  2.5 消毒  37
  2.6 本章小结  37-38
第三章 ELISA-AFM_1检测方法与标准方法的结果比对  38-44
  3.1 薄层色谱法（GB 5009.24-2010）  38-41
    3.1.1 试剂与材料  38-39
    3.1.2 分析步骤  39-40
    3.1.3 结果计算  40-41
  3.2 免疫层析净化荧光分光度法（GB 5413.37-2010 第三法）  41-42
    3.2.1 试剂和材料  41
    3.2.2 仪器和设备  41
    3.2.3 分析步骤  41-42
    3.2.4 计算  42
  3.3 几种检测方法的结果比对  42-43
    3.3.1 不同方法检测相同样品的结果  42-43
  3.4 本章小结  43-44
第四章 ELISA-AFM_1检测方法在其它乳制品中的应用  44-48
  4.1 试剂与仪器  44
  4.2 样品的采集  44-45
  4.3 样品的处理与净化  45-46
    4.3.1 液体乳制品  45
    4.3.2 半固体乳制品  45
    4.3.3 固体乳制品  45-46
  4.4 检测  46
  4.5 结果与讨论  46-47
  4.6 本章小结  47-48
结论与展望  48-49
参考文献  49-53
攻读硕士学位期间取得的研究成果  53-54
致谢  54-55
附件  55

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中图分类: > 工业技术 > 轻工业、手工业 > 食品工业 > 乳品加工工业 > 产品标准与检验
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