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农杆菌介导的二穗短柄草遗传转化体系的建立与优化

作　者: 龙欢
导　师: 马正强
学　校: 南京农业大学
专　业: 作物学
关键词: 二穗短柄草农杆菌 MSB培养基生根
分类号: Q943.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 2次
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内容摘要

二穗短柄草是禾本科植物基因组学和生物学研究的新型模式植物。随着二倍体短柄草Bd21基因组测序的完成大大促进了短柄草成为模式植物的进程。但二穗短柄草的转基因研究仍较为薄弱。农杆菌介导法是最主要的植物转化方法,具有转化效率高、转移片段明确、整合拷贝数低等特点。本研究致力于建立农杆菌介导的二穗短柄草遗传转化体系的建立,并优化转化过程。比较了1/2MS和MSB+MSB3培养基对农杆菌侵染的转化效率的影响,结果表明,具有MSB+MSB3培养基更有利于提高转化效率。此外,通过比较筛选结束后不同的分化时间对根系生长的影响,发现筛选后进行一周的分化更有利于后续根系的生长,将生根效率从50%提高至90%左右。本研究建立了较为高效的农杆菌介导的二穗短柄草Bd21的遗传转化体系,为短柄草基因工程的研究奠定了良好的基础。

全文目录

摘要  6-7
ABSTRACT  7-8
第一章文献综述  8-18
  一、短柄草简介  8-10
    (一) 分类地位  8-9
    (二) 自然多样性  9-10
    (三) 二穗短柄草的生物学特征  10
  二、短柄草工具库  10-16
    (一) 基因组序列  10-11
    (二) DNA文库  11
    (三) 微阵列  11-12
    (四) 转化、突变体和TILLING  12-13
    (五) 生物信息学及网络资源  13-16
  三、短柄草与病原菌的互作  16
  四、展望  16-18
第二章农杆菌介导的二穗短柄草遗传转化体系的建立和优化  18-28
  引言  18-19
  材料与方法  19-22
    一、材料  19-20
      (一) 植物材料  19
      (二) 农杆菌菌株和载体  19
      (三) 培养基  19-20
    二、方法  20-22
      (一) 外植体的取材和消毒  20
      (二) 胚性愈伤的产生  20-21
      (三) 农杆菌的培养和重悬  21
      (四) 侵染与共培养  21
      (五) 植株再生  21
      (六) PCR  21-22
      (七) 数据分析  22
  结果与分析  22-26
    一、胚性愈伤组织诱导与继代  22-23
    二、农杆菌侵染  23-24
    三、植株再生  24-26
    四、再生植株的鉴定  26
  讨论  26-28
参考文献  28-32
全文总结  32-34
全文创新点  34-36
致谢  36

农杆菌介导的二穗短柄草遗传转化体系的建立与优化

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