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孔石莼多糖及其铁（Ⅲ）配合物抗辐射有效部位筛选

作　者: 张宸阁
导　师: 卢卫红
学　校: 哈尔滨工业大学
专　业: 食品科学
关键词: 孔石莼多糖多糖铁(Ⅲ)配合物抗辐射蛋白质组
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

孔石莼是一种广泛分布于西太平洋沿海地区的大型绿藻,资源十分丰富。其具有很高的经济和药用价值,富含蛋白质、氨基酸、糖类等多种营养成分,味道鲜美.孔石莼多糖可增强机体免疫力,具有抗擬血、抗肿瘤、降胆固醇、抗氧化等药用保障功能。实验中对孔石莼多糖进行水提醇沉,并通过去蛋白、高速离心等对粗多糖进行纯化,预处理后通过100ku和30ku超滤膜对孔石莼多糖进行分级纯化,最终将其分为了≧100ku、30~100ku及≦30ku三个不同分子量段的多糖溶液。经小鼠骨髓细胞微核、肝脾脏系数测定、SOD活性测定及MDA含量测定等多项抗辐射实验,对其抗辐射作用效果进行了比较和筛选,最终发现≦30ku分子量段多糖溶液相较于另两种,其对因辐射引起的骨髓微核率的提升有明显抑制作用(P<0.01),对脾脏系数有较明显的升高(P<0.05),且在小鼠辐照后明显提升了其肝脏中SOD的活性并有效降低了其MDA的含量,通过以上实验结果显示,≦30ku分子量段多糖抗辐射作用强。取≦30ku分子量段多糖与铁(Ⅲ)离子进行螯合,得到孔石莼多糖铁(Ⅲ)配合物。能谱显示其铁元素的含量较高,原子分光光度法测得其铁含量为27.4%,通过红外光谱显示,其在850cm-1和650cm-1处有特征峰,显示其铁核为β-FeOOH。对多糖及多糖铁(Ⅲ)进行抗辐射实验后发现,两者均有较强的抗辐射作用,但效果差别不大。对多糖和多糖铁(Ⅲ)辐射实验中的小鼠脾脏进行2-DE蛋白组学研究。分析各组差异点后发现,相对于空白组,辐照对照组中2倍下调的蛋白点有13个,2倍上调的蛋白点有2个;相对于辐照对照组,多糖组中2倍下调蛋白点有5个,2倍上调的蛋白点有14个,多糖铁组中有8个2倍下调的蛋白点,12个2倍上调的蛋白点。从中选取五个差异点进行质谱分析(3502,4705, 5402,5803及6801),发现此五种蛋白分别为78kDa葡萄糖调控蛋白,脯氨酰羟化酶beta,亚基钙网蛋白前体,微管蛋白β5及波形蛋白等。经分析发现,这五种蛋白均与机体免疫及损伤相关,通过对多糖及多糖铁与辐照对照组相比较,发现这两者都在大多蛋白表达上有效果,且其抗辐射效果较好两者差异较小。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-10
第1章绪论  10-20
  1.1 立题背景  10
  1.2 孔石莼的国内外研究现状  10-14
    1.2.1 孔石莼来源及特征  10-11
    1.2.2 孔石莼的化学成分研究  11-12
    1.2.3 孔石莼的活性功能研究  12-13
    1.2.4 孔石莼的应用及展望  13-14
  1.3 多糖的研究现状  14-17
    1.3.1 多糖的结构分析  14-15
    1.3.2 多糖的活性研究  15-16
    1.3.3 多糖铁配合物的研究进展  16-17
  1.4 辐射伤害及抗辐射的相关研究  17-18
    1.4.1 辐射伤害的相关研究  17
    1.4.2 抗辐射的研究  17-18
  1.5 本课题研究的目的及意义  18-19
  1.6 本课题主要研究内容  19-20
第2章材料和方法  20-38
  2.1 材料及仪器  20-22
    2.1.1 材料与试剂  20-21
    2.1.2 仪器  21-22
  2.2 实验方法  22-38
    2.2.1 苯酚硫酸法测定总糖含量  22-23
    2.2.2 孔石莼粗多糖提取方法  23-24
    2.2.3 考马斯亮蓝法测多糖中蛋白含量  24-25
    2.2.4 Sevag 法脱蛋白  25-26
    2.2.5 膜分级处理  26-27
    2.2.6 抗辐照动物实验  27-30
    2.2.7 多糖与铁(Ⅲ)离子的螯合方法  30
    2.2.8 多糖铁(Ⅲ)配合物的表征方法  30-31
    2.2.9 脾组织蛋白质组学研究  31-36
    2.2.10 脾组织差异蛋白点的质谱鉴定与分析  36-38
第3章孔石莼多糖抗辐射有效部位筛选  38-45
  3.1 抗辐射动物模型的建立  38
  3.2 孔石莼多糖对辐照小鼠骨髓微核率的影响实验  38-40
  3.3 孔石莼多糖对辐照小鼠脏器系数的影响实验  40-42
  3.4 孔石莼多糖对辐照小鼠肝脏组织SOD 活性的影响实验  42
  3.5 孔石莼多糖对辐照小鼠肝脏组织MDA 含量的影响实验  42-43
  3.6 本章小结  43-45
第4章孔石莼多糖与铁(Ⅲ)螯合抗辐射作用比较  45-55
  4.1 多糖与铁(Ⅲ)离子螯合  45
  4.2 多糖铁(Ⅲ)能谱表征  45-47
  4.3 多糖铁(Ⅲ)红外光谱表征  47-49
  4.4 原子吸收光谱法测多糖铁(Ⅲ)中铁含量  49
  4.5 抗辐射动物模型的建立  49
  4.6 多糖及多糖铁(Ⅲ)对辐照小鼠骨髓微核率的影响实验  49-50
  4.7 多糖及多糖铁(Ⅲ)对辐照小鼠脏器系数的影响实验  50-52
  4.8 多糖及多糖铁(Ⅲ)对辐照小鼠SOD 活性的影响实验  52-53
  4.9 多糖及多糖铁(Ⅲ)对辐照小鼠MDA 含量的影响实验  53
  4.10 本章小结  53-55
第5章辐照致小鼠脾脏损伤蛋白质组学研究  55-66
  5.1 脾组织蛋白液的提取  55
  5.2 单向电泳蛋白图谱建立  55-56
  5.3 蛋白双向电泳图谱建立  56-57
  5.4 双向电泳蛋白图谱分析  57-60
  5.5 差异蛋白质谱分析  60-64
    5.5.1 3502 号差异蛋白分析  60-61
    5.5.2 4705 号差异蛋白分析  61-62
    5.5.3 5402 号差异蛋白分析  62-63
    5.5.4 5803 号差异蛋白分析  63
    5.5.5 6801 号差异蛋白分析  63-64
  5.6 本章小结  64-66
结论  66-68
参考文献  68-74
缩略词表  74-75
附录  75-95
攻读硕士学位期间发表的论文及其它成果  95-97
致谢  97

孔石莼多糖及其铁（Ⅲ）配合物抗辐射有效部位筛选

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