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染料木素拮抗对氧磷致大鼠血管内皮功能损伤的机制研究

作　者: 刘玉玲
导　师: 黄红林; 高治平
学　校: 南华大学
专　业: 药理学
关键词: 染料木素 对氧磷 血管内皮依赖性舒张 NADPH氧化酶 p22phox Nox4
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


研究背景：血管内皮细胞（Vascular Endothelial Cell，VEC）是一层单层扁平上皮细胞，存在于血液与血管壁之间。血管内皮细胞参与机体的物质转运、凝血、免疫等多种生命活动，合成并释放多种血管活性物质，调节血管生理活动。氧化应激、炎症、免疫应答及毒素等多种因素可导致血管内皮细胞损伤，并进一步引起细胞功能障碍，血管壁功能损伤，引发多种心血管疾病。对氧磷（paraoxon，PO）是有机磷酸酯类农药在机体内通过肝脏P450系统代谢生成的具有生物活性的物质，可引起机体氧化应激反应增强，损伤血管内皮，诱发心血管疾病。染料木素（genistein，GST）是主要存在于豆科植物中的一种植物雌激素，具有多酚羟基结构，可直接发挥抗氧化作用；同时染料木素还能提高机体抗氧化酶的水平和活性，抑制NADPH氧化酶的活性，间接发挥抗氧化作用，避免或减轻血管内皮细胞的氧化损伤，维持血管内皮的正常功能。NADPH氧化酶最早发现存在于巨噬细胞和中性粒细胞中，内皮细胞中Nox4、p22phox是NADPH氧化酶的主要表现形式。NADPH氧化酶的主要功能是参与机体活性氧（reactive oxygenspecies，ROS）的生成，调节机体的氧化应激反应。目的：探讨染料木素对对氧磷诱导的血管内皮损伤的保护作用及可能机制，为预防心血管疾病提供理论参考。方法：（1）离体血管环实验检测血管舒缩功能：取雄性SD大鼠胸主动脉制做离体胸主动脉血管环，测量并记录血管环张力。实验分组如下：溶媒对照组：用0.1%的二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）预孵育血管环30min后，检测大鼠胸主动脉环对乙酰胆碱(acetylcholine，Ach；1×10-9～1×10-5mol/L)诱导的内皮依赖性舒张（endothelium-dependent relaxation，EDR）功能及硝普钠（sodium nitroprusside，SNP；1×10-6mol/L）诱导的非内皮依赖性舒张功能的反应；各浓度PO处理组：分别用不同浓度的PO(4.05×10-9～4.05×10-5mol/L)预孵育血管环30min后，检测大鼠胸主动脉环对Ach及SNP诱导的血管舒张功能的反应；PO+GST处理组：分别用PO(4.05×10-6mol/L)与不同浓度的GST(1×10-9，3×10-9，1×10-8，3×10-8，或1×10-7mol/L)共同孵育血管环30min后，检测大鼠胸主动脉环对Ach及SNP诱导的血管舒张功能的反应及对苯肾上腺素(phenyllphrine，PE；1×10-6mol/L)诱导的血管收缩功能的反应；（2）RT-PCR检测p22phox和Nox4mRNA的表达：取雄性SD大鼠胸主动脉，分别用DMSO（0.1%）、GST(1×10-7mol/L)、PO(4.05×10-5mol/L)、PO(4.05×10-5mol/L)+GST(1×10-7mol/L)处理30min，RT-PCR法检测各组p22phox、Nox4mRNA表达的变化；（3）western-blotting观察p22phox和Nox4蛋白表达的变化：取雄性SD大鼠胸主动脉，处理方法及实验分组同（2），观察各组p22phox、Nox4蛋白表达的变化。结果：（1）离体血管环实验检测血管舒缩功能：PO(4.05×10-9～4.05×10-5mol/L)可浓度依赖性地抑制Ach诱导的EDR反应，对SNP诱导的非内皮依赖性舒张功能没有影响；GST(1×10-8，3×10-8或1×10-7mol/L)可减轻PO(4.05×10-6mol/L)对EDR的抑制作用，且GST浓度为1×10-8～3×10-8mol/L时，该作用具有剂量效应，但GST对SNP诱导的非内皮依赖性舒张反应没有影响；同时各浓度GST与PO共同孵育血管环，可浓度依赖性地抑制PE诱导的血管收缩；（2）RT-PCR检测各处理组p22phox和Nox4mRNA的表达：较之溶媒对照组（0.1%的DMSO处理），PO处理组p22phox和Nox4mRNA表达明显增加；GST处理组p22phox和Nox4mRNA表达明显减少；PO+GST共同处理组，p22phox mRNA表达较之溶媒对照组有所增加，但无显著差异（P＞0.05）；Nox4mRNA表达增加，与溶媒对照组比较有显著差异（P＜0.05）；与PO单独处理组比较，PO+GST共同处理组，p22phox mRNA表达明显减少（P＜0.05）；Nox4mRNA表达减少，但无显著差异；（3） western-blotting观察p22phox和Nox4蛋白表达的变化：与溶媒对照组比较，PO处理组p22phox和Nox4蛋白表达明显增加；GST处理组p22phox和Nox4蛋白表达明显减少；PO+GST共同处理组，p22phox蛋白表达较之溶媒对照组有所增加，但无显著差异（P＞0.05）；Nox4蛋白表达增加，较溶媒对照组有显著差异（P＜0.01）；与PO单独处理组比较，PO+GST共同处理组，p22phox蛋白表达明显减少（P＜0.05）；Nox4蛋白表达减少，但无显著差异（P＞0.05）。结论：（1）对氧磷可损伤血管内皮依赖性舒张功能，染料木素对该损伤效应具有拮抗作用，可改善对氧磷损伤的血管内皮依赖性舒张功能（2）对氧磷可上调血管组织p22phox、Nox4mRNA和蛋白的表达，损伤血管内皮功能；染料木素则可下调二者的表达，保护血管内皮功能

全文目录


主要英文缩略词  5-6
中文摘要  6-9
Abstract  9-12
前言  12-14
材料与方法  14-22
  1 材料  14-16
  2 方法  16-21
    2.1 离体血管环实验检测大鼠胸主动脉舒缩功能  16-18
    2.2 RT-PCR 检测大鼠胸主动脉 p22phox 和 Nox4 mRNA 的表达  18-20
    2.3 western-blotting 检测大鼠胸主动脉 p22phox 和 Nox4 蛋白的表达  20-21
  3 实验结果统计学处理  21-22
结果  22-29
  1 染料木素和对氧磷对大鼠胸主动脉舒缩功能的影响  22-25
  2 染料木素、对氧磷对大鼠胸主动脉 p2 2 phox 和 Nox4 mRNA 表达的影响  25-26
  3 染料木素、对氧磷对大鼠胸主动脉 p22phox 和 Nox4 蛋白表达的影响  26-29
讨论  29-32
结论  32-33
参考文献  33-35
综述  35-47
  参考文献  40-47
附录  47-48
致谢  48

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学
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