学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

白芍总苷对角质形成细胞分泌IL-8、ICAM-1及Ki67的影响

作　者: 王佳媚
导　师: 杨桂兰
学　校: 兰州大学
专　业: 皮肤病与性病学
关键词: 白芍总苷(TGP) HaCaT细胞(KC) 银屑病、IL-8 ICAM-1 Ki67
分类号: R758.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 29次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的以银屑病为代表的慢性、复发性、炎症性皮肤病,是皮肤科最常见的疾病之一,这类疾病不但发病率高,而且顽固难治,易于反复。其具体的发病机制仍不清楚,因此成为研究重点。银屑病在病理上以大量的T淋巴细胞活化、浸润为特征,T淋巴细胞释放大量细胞因子,影响角质形成细胞的免疫功能,而皮肤为T淋巴细胞介导的免疫反应的发生发展提供了一个复杂的微环境,浸润的T淋巴细胞和角质形成细胞之间的相互作用在这类炎症性皮肤病的发病机制中起关键作用。目前的研究结果显示,以T细胞驱动的、以角质形成细胞为靶细胞的免疫性炎症反应是银屑病的主要发病机制,其中Thl淋巴细胞起到重要作用。IFN-γ是Th1淋巴细胞分泌的重要细胞因子之一,是调节皮肤炎症和免疫反应的最有效的促炎因子,对角质形成细胞有活化作用,并可使角质形成细胞表达许多趋化因子、细胞因子和膜分子,进一步级联放大了炎症反应。多形核中性粒细胞聚集至表皮是通过IL-8的趋化作用来实现的。角质形成细胞与炎性细胞间的黏附是由ICAM-1实现的。因此,研究角质形成细胞中IFN-γ介导的炎症的反应及其信号传导机制,有助于对Th1占优势的皮肤炎症反应提出合理治疗方法,以及有助于揭示药物治疗此类疾病的机制及疗效预测。TGP具有多途径抑制自身免疫反应、抗炎、抗病毒等作用。因此,本研究以永生化人角质形成细胞株(HaCaT细胞)为研究靶细胞,研究白芍总苷对HaCaT细胞中IFN-γ介导的炎性细胞因子分泌、信号转导途径及角化的影响。旨在探讨白芍总苷对Th1型炎症模式下HaCaT细胞的调节作用,为其在该类疾病中的应用提供理论支持。方法在培养的HaCaT体系中,用IFN-γ建立实验诱导模型,分为实验组(白芍总苷处理)、空白对照组与阳性对照组(T0组),采用MTT法分别检测12h、24h白芍总苷对HaCaT细胞活力的影响,为下一步药物试验确定给药浓度范围。分别加入安全浓度的待测药物共培养(96孔细胞培养板,每孔0.2mL,每浓度3个复孔,37℃、5%CO2孵箱内培养)。于培养后24h将细胞上清去掉,再加入500U/mL rhIFN-γ刺激HaCaT细胞48h,48h后收集培养上清,用ELISA测定细胞上清液中IL-8、ICAM-1表达。取对数生长期,生长状态良好的细胞,接种于六孔板内的盖玻片上,12h后加入安全浓度的待测药物共培养24h,再按照各分子表达的最佳作用时间,加入500U/mL rhIFN-γ刺激HaCaT细胞,收集不同时间点的细胞,用荧光免疫组化法定位Ki-67、ICAM-1表达情况。结果1.MTT法检测白芍总苷对HaCaT细胞活力的影响TGP对HaCaT细胞增殖呈双向调节作用,在低浓度(0.5μg/mL～12.5μg/mL)时对HaCaT细胞增殖有促进作用,在高浓度(25μg/mL～125μg/mL)时对HaCaT细胞增殖呈抑制作用。2.ELISA法测定细胞上清液中IL-8、ICAM-1表达0.5μg/mL～125μg/mLTGP预处理24h后,可降低HaCaT细胞上清液中表达IL-8、ICAM-1的水平(*P＜0.05,*P＜0.01)。且在25μg/mL～125μg/mLTGP浓度范围内对细胞上清中IL-8的表达有抑制,在0.5μg/mL～25μg/mLTGP浓度范围内对细胞上清中ICAM-1的表达有显著抑制。3.荧光免疫组化法定位ICAM-1、Ki-67表达情况在TGP药物浓度0.5μg/mL～25μg/mL时对ICAM-1的表达有显著抑制。随着TGP药物浓度的降低,ICAM-1在胞核的表达明显减弱,在胞浆的表达没有胞核减弱得明显,但也有所减弱。在TGP药物浓度0.5μg/mL～25μg/mL时Ki67在细胞核的荧光表达明显减弱。结论TGP具有双向调节功能,对HaCaT细胞分泌IL-8、ICAM-1及Ki67表达有抑制。

全文目录

引言  3-7
缩略语  7-8
中文摘要  8-10
Abstract  10-13
第一章 MTT法检测白芍总苷对HaCaT细胞活力的影响  13-17
  1.1 目的  13
  1.2 材料与方法  13
  1.3 试剂配制  13-14
  1.4 统计学处理  14-15
  1.5 结果  15-16
  1.6 结论  16
  1.7 讨论  16-17
第二章 ELISA法测定细胞上清液中IL-8、ICAM-1表达  17-23
  2.1 目的  17
  2.2 材料与方法  17-18
  2.3 统计学处理  18-19
  2.4 结果  19-21
  2.5 结论  21
  2.6 讨论  21-23
第三章荧光免疫组化法定位Ki67、ICAM-1的表达情况  23-32
  3.1 目的  23
  3.2 材料及方法  23-24
  3.3 实验方法  24
  3.4 结果判定  24-25
  3.5 统计学处理  25
  3.6 结果  25-30
  3.7 讨论  30-32
第四章结论  32-33
综述  33-39
参考文献  39-42
在学期间的研究成果  42-43
致谢  43

白芍总苷对角质形成细胞分泌IL-8、ICAM-1及Ki67的影响

内容摘要

全文目录

相似论文