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原子力显微镜对人口腔鳞状上皮膜抗体结合后细胞膜表面形态的观察

作　者: 王牧
导　师: 纪小龙
学　校: 辽宁医学院
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 原子力显微镜口腔鳞状上皮细胞细胞膜抗体
分类号: R781.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的应用原子力显微镜（Atomic Force Microscope, AFM）直观的观察人口腔鳞状上皮细胞及结合膜抗体前后细胞膜表面的形态结构，从纳米级水平提供抗体结合于细胞表面的形貌图，为免疫组织化学（Immunohistochemistry）纳米级研究及抗原的精确定位和抗体“例外”表达现象的深入认识提供新思路。方法受检者按滴加试剂不同分为三组：即第一组PBS对照组、第二组EMA抗体实验组和第三组S-100抗体实验组。受检者纳入标准：1.20岁-35岁的男性；2.无口腔黏膜疾患病史；3.口腔内无局部刺激因素；4.无与放射性物质或有毒化学物质接触史；5.无吸烟史；6.经过协商同意受检口腔鳞状上皮细胞。采用细胞涂片法，应用AFM的contact模式对口腔鳞状上皮细胞抗体结合前后的细胞膜表面结构进行扫描。应用AFM软件分析系统测量和分析细胞的膜表面重要参数即平均粗糙度（Ra）、最大峰高度（Rmax），然后利用SPSS13.0统计分析软件对所测得的细胞表面Ra、Rmax数据进行统计分析。结果1病理细胞学结果在光镜下观察各组口腔鳞状上皮细胞涂片免疫组化染色结果，可看出EMA抗体实验组免疫组化染色细胞膜呈阳性，胞浆与胞核阴性。PBS对照组及S-100抗体实验组免疫组化染色细胞膜、浆、核均呈阴性。2AFM细胞扫描图应用原子力显微镜分别观察对照组和两实验组的口腔鳞状上皮细胞。各组口腔鳞状上皮分别滴加PBS缓冲液、1:1稀释的EMA抗体及S-100抗体后扫描。①单个整体细胞的轮廓无显著差异，口腔鳞状上皮细胞呈扁平状，外形不规则，多呈圆形、椭圆形及多边形。②对照组细胞局部扫描见细胞膜的表面高低起伏，隆起松散欠规则，呈“山包状”或“山峦状”，隆起之间形成凹陷，凹陷宽度与深度不等。EMA抗体实验组口腔鳞状上皮细胞细胞膜表面形态与对照组相比较，大部分细胞可见膜表面有颗粒状物质附着，大小较一致、形状较规则、数量不等、分布不均匀。局部扫描可见颗粒物质均呈山峰状结构附着于细胞膜表面隆起的“山包”或“山峦”上，平均宽约2μm，平均高度约600nm。细胞膜表面隆起处高度更高，最大峰高度随之增加，膜表面高低起伏明显，粗糙度明显变大。S-100抗体实验组较对照组细胞膜表面形态无明显差异。3统计学分析结果全部数据分为3个组，对每张高度图（Height）中的平均粗糙度和最大峰高度进行统计学分析，所有数据以均数±标准差（x±s）的形式表示。三个组平均粗糙度(nm)分别为32.799±1.769，61.168±2.863，33.317±1.845。最大峰高度(nm)分别为253.33±1.34，572.863±2.363，248.87±1.587。抗体结合后的实验组口腔鳞状上皮细胞膜表面平均粗糙度、最大峰高度与对照组比较，有显著差异（p<0.05）。未结合抗体的实验组口腔鳞状上皮细胞膜表面平均粗糙度、最大峰高度与对照组比较，差异无统计学意义（p>0.05）。结论在原子力显微镜下观察抗体结合后人口腔鳞状上皮细胞细胞膜表面的形态结构，可见大部分细胞有颗粒状物质附着，颗粒高度约600nm，宽度约2μm，颗粒数量不等、分布不均，细胞粗糙度及最大峰高度值较对照组增加。未结合抗体的细胞细胞膜表面较对照组无明显变化。抗体结合后细胞膜表面发生了特异的改变，从纳米级水平为我们提供了一条临床诊断的新思维，为以后的免疫组化纳米级研究奠定基础，提示AFM在临床鉴别诊断方面有可能成为具有一定诊断价值的辅助诊断工具。

全文目录

中文论著摘要  4-7
英文论著摘要  7-11
英文缩略语表  11-12
前言  12-14
实验材料与方法  14-17
实验结果  17-27
讨论  27-30
结论  30-31
本研究创新性自我评价  31-32
参考文献  32-35
文献综述  35-43
  参考文献  40-43
在学期间科研成绩  43-44
致谢  44-45
个人简介  45-46

原子力显微镜对人口腔鳞状上皮膜抗体结合后细胞膜表面形态的观察

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