学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

环孢霉素A对人晶状体上皮细胞抑制的体外研究

作　者: 苗青
导　师: 张红
学　校: 天津医科大学
专　业: 眼科学
关键词: 后发性白内障 环孢霉素A PCNA基因 RT-PCR
分类号: R776.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 8次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的体外研究环孢霉素A(CsA)对人晶状体上皮细胞(HLEB-3)抑制,计算CsA对人晶状体上皮细胞的半数有效抑制浓度；定量测定PCNA基因在无CsA处理的对照组与CsA处理的实验组中的表达,进一步探讨CsA抑制人晶状体上皮细胞增殖的分子作用机制,验证CsA与PCNA阳性细胞表达量的关系,为CsA修饰的IOL体内实验提供依据。方法体外培养来源于广州中山医科大学眼科中心的人晶状体上皮细胞株HLE B-3细胞。(1)细胞增殖实验的测定观察细胞增殖状态,实验设置10个细胞浓度梯度(0.125×104个/ml、0.25×104个/ml、0.5×104个/ml、1.0×104个/ml、1.5×104个/ml、2.0×104个/ml、2.5x104个/ml、3.0×104个/ml、3.5x104个/ml、4.0×104个/ml)。以2×104个/ml细胞密度种植96孔板,设置实验组与对照组,实验组给予CsA刺激,浓度为1ug/ml、2ug/ml、4ug/ml、8ug/ml、16ug/ml,作用时间24h、48h、72h,对照组无CsA刺激,作用时间24h、48h、72h。每组设2个平行复孔,重复3次。(2)PCNA基因的表达测定以1×105个/ml的细胞密度接种于24孔板,实验组给予CsA刺激,浓度lug/ml,作用24h、48h,对照组无CsA刺激,应用RT-PCR检测PCNA基因的复制；应用组织免疫学方法检测PCNA阳性细胞的表达。每组设2个平行复孔,重复3次。(3)RT-PCR结果应用2-△△CT统计量进行分析,免疫组织化学结果分别应用PI及IPP.5.0图像分析法。所有统计学数据,应用SPSS19.0进行统计学分析,检验水准a=0.05。结果(1)在低浓度时(1ug/m1)CsA作用24h对人晶状体上皮细胞的增殖抑制实验组与对照组差异不具有统计学意义(P>0.05),作用48h对细胞增殖抑制实验组与对照组差异具有统计学意义(P<0.05)。CsA作用24h,IC50=71.010±1.851μg/ml,Probit=-2.964+1.601x; CsA作用48h, IC50=25.529±1.407μg/ml,Probit=-1.363+1.969x; CsA作用72h, IC50=17.881±1.252μg/ml,Probit=-5.915+4.723x。CsA对HLEB-3细胞的抑制呈时间依赖性及浓度依赖性。(2) RT-PCR测定,CsA lug/ml作用24hPCNA表达量实验组与对照组差异不具有统计学意义(P>0.05),作用48hPCNA表达量实验组与对照组差异具有统计学意义(P,0.05)。(3)免疫组织化学测定,CsA lug/ml作用24h、48hPCNA阳性细胞在实验组与对照组中,作用24h差异不具有统计学意义(P>0.05)；作用48h差异具有统计学意义(P<0.05)。结论(1) CsA1ug/ml作用24h,不能对HLE-B3增殖的抑制产生有效作用；在持续作用至48h时,CsA能够有效抑制HLEB-3细胞的增殖。CsA对HLEB-3细胞抑制呈时间依赖性；在有效抑制浓度(1ug/m1)下,CsA对HLEB-3的抑制呈浓度依赖性,其半数抑制率提高。(2) CsA能够抑制PCNA基因的表达,且呈时间依赖性。环孢霉素A能够抑制PCNA蛋白的表达,且呈时间依赖性。(3) CsA通过抑制抑制PCNA基因表达抑制HLEB-3细胞增殖。综上,CsA lug/ml持续作用至48h,能有效抑制HLE B-3细胞的增殖,干预后发性白内障的形成,为防治后发性白内障的可行性药物。此结果将为CsA修饰的载药性人工晶状体的体内实验提供依据。

全文目录


相似论文

  1. 凡纳滨对虾性腺抑制激素基因的克隆与表达,S917.4
  2. PRRSV的感染差异性和抗体依赖性增强作用研究,S858.28
  3. 小麦苗期磷胁迫诱导紫色酸性磷酸酶基因和转录因子基因cDNA片段的克隆与分析,S512.1
  4. MMP-7和溶菌酶在DSS诱导的Balb/c小鼠溃疡性结肠炎模型发病机制中的作用,S858.91
  5. 不同培养方法和细胞因子对小鼠生精细胞的增殖分化效应,R329
  6. 组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A对猪卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响,S828
  7. 实时荧光定量PCR与普通RT-PCR检测粪肠球菌esp基因的差异,R440
  8. 靶标代谢组学与实时荧光定量PCR分析技术在疾病研究中的应用,R541.4
  9. 埃他卡林对慢性低氧大鼠肺动脉VEGFmRNA和蛋白表达的影响,R543.2
  10. 昆虫OBP CSP和sid-1基因的预测及序列分析,Q78
  11. 甲型H1N1流感病毒Real-Time RT-PCR检测内参照品的研究,R440
  12. 广州地区婴幼儿病毒性腹泻感染研究,R725.1
  13. BP1、COX-2在人乳腺癌细胞株MDA-MB-435和MCF-7中的表达及其意义,R737.9
  14. 血小板源性生长因子-D在膀胱癌中的表达及其临床意义,R737.14
  15. Pim-3和bc1-2在人食管鳞癌组织中的表达及相关性研究,R735.1
  16. 生殖细胞核因子在恶性生殖细胞肿瘤中的表达,R737.31
  17. 结直肠癌前哨淋巴结活检及前哨淋巴结微转移检测,R735.3
  18. Syk在人食管鳞癌组织中的表达及其临床病理关系研究,R735.1
  19. TRAIL与LDM联用和作用机制及TRAIL蛋白的表达,R734.2
  20. 免疫球蛋白重链结合蛋白在人骨肉瘤细胞中的表达及临床意义,R738.1
  21. COX-2在子宫内膜腺癌组织中的表达及其意义,R737.33

中图分类: > 医药、卫生 > 眼科学 > 晶状体与玻璃体疾病 > 白内障
© 2012 www.xueweilunwen.com