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ANXA2敲除对结肠癌caco2细胞运动相关形态的研究

作　者: 崔婷婷
导　师: 侯颖春
学　校: 陕西师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 细胞微结构 膜联蛋白A2 结直肠癌 细胞运动
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


背景与目的：近年来,随着人民生活水平的日益提高,我国结直肠癌的发病率呈逐年增高的趋势。目前主要以手术治疗为主,辅以局部或全身的放疗和化疗。但术后易复发及肝转移的问题仍然是无法控制和得以根本解决的。随着分子生物学技术的发展,基因治疗有望成为结肠癌等恶性肿瘤治疗的新思路和新方法。基因敲除技术是目前广泛用于抗肿瘤研究的方法之一,其关键点在于基因靶点的选择。膜联蛋白A2(AnnexinA2, ANXA2),近年来大量的研究已经证实,ANXA2的表达失调与多种肿瘤的发生发展密切相关,其表达在人类绝大多数肿瘤中均上调,这种过表达现象与肿瘤的发生、发展、浸润、转移及预后差等密切相关。而细胞骨架在细胞运动、迁移以及维持细胞形态稳定中起着非常重要的作用。有报道显示,ANXA2与肌动蛋白F-Actin等骨架蛋白以及多种与细胞骨架变构、运动相关的调节因子相互作用,从而影响肿瘤细胞的恶性行为。因此,我们实验室构建了ANXA2敲除的caco2细胞系,在查阅了大量资料的基础上,综合分析国内外相关研究进展,初步探究了ANXA2与细胞骨架相互作用之间的关系,研究了ANXA2对caco2细胞运动力的影响。本实验为肿瘤的基因治疗研究提供参考资料。方法：本实验将ANXA2基因敲除的结肠癌细胞系(ANXA2-/-caco2)作为实验组,以野生型结肠癌细胞系(ANXA2+/+caco2)作为对照组,研究了实验组细胞在外部形态、内部结构以及细胞骨架方面发生的变化。(1)使用扫描电镜技术分析对照组和实验组细胞表面形态的差异；(2)使用透射电镜技术分析细胞内部结构差异；(3)利用免疫荧光技术分析细胞骨架中微丝F-actin、微管β-tublin的变化；(4)利用免疫组化技术分析核纤层LaminB的变化。结果：(1) ANXA2基因敲除后,扫描电镜结果显示,caco2细胞表面的丝状伪足生长缓慢,微绒毛明显变细变少。(2)透射电镜结果显示,ANXA2敲除后caco2细胞内可见更多的染色质凝集、线粒体减少、核膜解聚。(3)野生型caco2细胞的F-actin沿着质膜内表面和胞质密集的分布,而基因敲除ANXA2的caco2细胞中F-actin沿着质膜和胞质内的分布明显减少,β-tubulin在胞质内的分布减少,但差异不明显。(4)野生型caco2细胞的laminB在细胞核膜内侧密集的分布,而基因敲除ANXA2的caco2细胞中laminB在胞核膜内侧的分布明显减少。结论：ANXA2与人结直肠癌caco2细胞的生长、增殖、凋亡及运动力密切相关,抑制ANXA2的表达可抑制caco2细胞的增殖力和体外迁移能力,促进细胞凋亡。本实验通过研究ANXA2敲除后caco2细胞运动有关的微结构的变化,从而推测ANXA2表达与细胞运动性的关系,而这一关系直接和癌细胞的侵袭、转移等癌发展过程密切相关。同时,对ANXA2基因表达的干预作为一种新的基因治疗技术在结直肠癌治疗方面的应用潜力值得进一步研究,将给结直肠癌的治疗带来新的思路和策略。

全文目录


摘要  3-5
Abstract  5-9
英文缩略词一览表  9-11
第1章 文献回顾  11-23
  1.1 膜联蛋白A2  11-16
    1.1.1 膜联蛋白家族简介  11-12
    1.1.2 ANXA2与肿瘤  12-16
  1.2 基因敲除技术  16-18
  1.3 ANXA2与细胞骨架研究进展  18-23
第2章 本课题的研究内容及意义、技术路线与创新之处  23-27
第3章 ANXA2敲除对caco2细胞亚显微结构的研究  27-39
  3.1 扫描电镜观察细胞表面结构的变化  27-36
    3.1.1 实验材料  27-28
    3.1.2 实验仪器设备  28
    3.1.3 实验方法与步骤  28-31
    3.1.4 结果与讨论  31-36
  3.2 透射电镜观察细胞内部结构变化  36-39
    3.2.1 实验材料  36
    3.2.2 实验方法与步骤  36-37
    3.2.3 结果与讨论  37-39
第4章 ANXA2敲除对caco2细胞骨架变化的影响  39-53
  4.1 免疫荧光观察细胞微丝蛋白F-actin变化情况  39-43
    4.1.1 实验材料  39
    4.1.2 实验方法和步骤  39-40
    4.1.3 结果与讨论  40-43
  4.2 免疫荧光观察细胞运动相关蛋白β-tublin变化情况  43-47
    4.2.1 实验材料  43-44
    4.2.2 实验方法和步骤  44
    4.2.3 结果与讨论  44-47
  4.3 免疫组化检测核纤层LaminB变化情况  47-53
    4.3.1 实验材料  47-48
    4.3.2 试验方法与步骤  48-49
    4.3.3 结果与讨论  49-53
总结  53-56
参考文献  56-69
致谢  69-70
攻读硕士学位期间的科研成果  70

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肠肿瘤 > 结肠肿瘤
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