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ANXA1、β-catenin在非小细胞肺癌组织中的表达差异及二者表达相关性研究

作　者: 李红玲
导　师: 撒亚莲; 沈涛
学　校:
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 癌非小细胞肺 beta-连环素膜联蛋白A1 基因表达实时荧光定量PCR 蛋白质印迹法免疫组织化学染色
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

2012年,据美国癌症协会发布的统计数据显示,肺癌已成为最常见的恶性肿瘤和首位的肿瘤死亡原因。其中,非小细胞肺癌(Non-small Cell Lung Cancer, NSCLC)在肺癌中的比例约达80%,多年来即便诊治技术有了一定的提高,但是患者5年生存率仍然没有明显改善,且大部分患者被诊断时已是晚期故得不到成功的治疗。因此,早期诊断和寻找新的治疗路径已经成为治疗非小细胞肺癌的关键。膜联蛋白A1(Annexin A1,ANXA1)是Ca2+依赖的磷脂结合蛋白,参与抗炎症反应、细胞分化和增殖、细胞死亡信号调控、凋亡细胞吞噬清除等多种细胞病理生理过程。近年来研究发现ANXA1在多种恶性肿瘤,如头颈鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌、前列腺癌、肝癌、直肠癌等的发生发展过程中起到重要作用,与肿瘤的恶性程度、浸润转移及预后相关。但ANXA1在非小细胞肺癌组织中的表达差异性研究的报道较少。Wnt/β-Catenin信号转导通路(以下简称"Wnt通路”)是近年来肿瘤研究的热点,在生物发育、细胞转运及细胞凋亡等生命过程中发挥着重要作用,其异常活化在多种人类肿瘤的发生发展中发挥着重要作用。Beta-连环素(β-catenin)作为Wnt通路中最关键的信号传递分子,其表达量的改变及在细胞内的分布可影响Wnt通路。本课题在本科室已有研究工作的基础上,初步探讨ANXA1和β-catenin在非小细胞肺癌组织中的表达差异,期望为非小细胞肺癌的早期诊断和寻找新的治疗方法提供理论基础。目的：检测ANXA1和Wnt通路中关键蛋白β-catenin在经临床病理确诊的NSCLC患者的肿瘤组织标本和肿瘤边缘5cm以外的远癌组织标本中的表达,分析二者在NSCLC癌组织中的表达是否存在相关性,从而探讨ANXA1是否参与调控NSCLC生物学行为,会否影响NSCLC进展中Wnt通路的调节过程。方法：以64例经病理确诊的NSCLC癌组织为实验组,以同一患者对应的远癌组织(距肿瘤边缘>5cm)为对照组,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测实验组和对照组中ANXA1、β-catenin mRNA及蛋白表达情况,并采用免疫组织化学染色法对ANXA1、β-catenin蛋白的表达进行定位检测,应用SPSS17.0统计学软件进行数据分析,计量资料的比较采用t检验或单因素方差分析,计数资料的比较采用χ2检验,相关性分析采用Spearman秩相关分析。结果：1.实时荧光定量PCR法：①肺癌组织中ANXA1mRNA表达水平高于同一患者的远癌组织(0.574±1.403vs.0.240±0.893),差异具有统计学意义(t=2.060P=0.045)。其表达差异与分化程度、淋巴结转移和患者的TNM分期密切相关(F=9.954P=0.000,t=2.186P=0.036,F=4.564P=0.0151,与性别、年龄、吸烟史、肿瘤直径、组织学类型无关(P>0.05)。②肺癌组织中β-catenin mRNA的表达高于远癌组织(0.059±0.130vs.0.033±0.078),差异具有统计学意义(t=2.125P=0.040)。其表达差异与分化程度、淋巴结转移相关(F=4.888P=0.014,t=-2.465P=0.023),与性别、年龄、吸烟史、肿瘤直径、组织学类型、TNM分期无关(P>0.05)。③在mRNA水平上,ANXA1和β-catenin在肺癌组织中的表达呈正相关关系(r=0.368P=0.008)。2.免疫组织化学染色法：①在正常组织中,ANXA1蛋白不表达或少量表达,在肺癌组织中呈明显的高表达,且多表达于肺癌组织的胞浆和胞膜,在癌旁组织的巨噬细胞中亦可观测到其表达增高。肺癌组织中ANXA1蛋白的阳性表达率明显高于癌旁组织(76.6%(49/64) vs.3.1%(2/64)),差异具有统计学意义(χ2=72.002P=0.000)。其表达差异与分化程度、淋巴结转移情况和患者的TNM分期密切相关(χ2=9.661P=0.008,2,2=6.050P=0.014,,=7.018P=0.030),与性别、年龄、吸烟史、肿瘤直径、组织学类型无关(P>0.05)。②在正常组织中,β-catenin蛋白少量表达于胞浆和胞膜,但在肺癌组织中则呈现明显的高表达趋势,且大量聚集在肺癌组织的细胞膜,还观察到其在癌组织细胞核中的异常沉积。在肺癌组织中β-catenin蛋白的阳性表达率高于远癌组织(71.9%(46/64) vs.3.1%(2/64)),差异具有统计学意义(χ2=64.533P=0.000)。其表达差异与性别、分化程度、淋巴结转移有关(χ2=4.753P=0.029,χ2=11.077P=0.004,χ2=5.154P=0.023),与年龄、吸烟史、肿瘤直径、组织学类型、TNM分期无关(P>0.05)。③在蛋白质水平上,ANXA1和P-catenin在肺癌组织中的表达呈正相关关系(r=0.638,P=0.000)。3.蛋白质印迹法：①在正常组织中,有ANXA1和P-catenin的表达。②ANXA1蛋白在肺癌组织中的表达量显著高于远癌组织。③β-catenin蛋白在肺癌组织中的表达量高于远癌组织。结论：ANXA1、β-catenin mRNA及蛋白在肺癌组织中均呈现高表达特点,统计结果提示二者在肺癌组织中的表达具有显著相关性,且二者在肺癌组织中的表达差异与肿瘤细胞的分化程度和肿瘤的侵袭转移能力密切相关,提示ANXA1基因可能参与NSCLC的发生发展,并可能与NSCLC进展中Wnt/β-Catenin信号转导通路的调节有关。

全文目录

中文摘要  5-8
Abstract  8-12
英文缩略词  12-13
引言  13-15
第一部分 ANXA1在非小细胞肺癌组织中的表达研究  15-29
  材料和方法  15-22
  结果  22-27
  讨论  27-28
  结论  28-29
第二部分 β-catenin在非小细胞肺癌组织中的表达研究  29-36
  材料和方法  29
  结果  29-32
  讨论  32-35
  结论  35-36
第三部分 ANXA1、β-catenin在非小细胞肺癌组织中表达的相关性研究  36-42
  材料和方法  36
  结果  36-40
  讨论  40-41
  结论  41-42
全文结论  42-43
参考文献  43-46
文献综述1  46-52
  参考文献  50-52
文献综述2  52-60
  参考文献  57-60
攻读学位期间发表文章情况  60-61
致谢  61

ANXA1、β-catenin在非小细胞肺癌组织中的表达差异及二者表达相关性研究

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