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PDTC对乙炔雌二醇诱导孕鼠胆汁淤积肝脏Bsep/Ntcp表达的影响及分子机制

作　者: 李苏萍
导　师: 吴新华
学　校: 中南大学
专　业: 妇产科学
关键词: 乙炔雌二醇胆汁淤积肝内大鼠 Sprayne Dawley 核因子-κB PDTC Bsep Ntcp
分类号: R714.25
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：通过给孕鼠注射17-p-乙炔雌二醇(17-beta-ethinyl estradiol,EE)建立妊娠肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)模型,检测孕鼠肝组织核因子κB (nuclear kappa B,NF-κB) p65的表达水平,并探讨NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对NF-κB信号通路的胆盐输出泵(bile salt export pump,Bsep)、钠-牛磺胆酸盐共转运多肽(Na+-taurocholatecotransporting polypeptide,Ntcp)蛋白表达水平的影响及可能机制。方法：选用50只雌性SD孕鼠作为研究对象,(1)、妊娠第15天起随机分为5组孕鼠,包括正常妊娠对照组、模型组、高剂量治疗组、低剂量治疗组和PDTC对照组各10只,每组处理如下：正常妊娠对照组为颈后皮下及腹腔分别注射2.5ml.kg-1.d-1和2.5ml.kg-1.d-11,2-丙二醇(溶剂)；模型组为颈后皮下注射EE2.5ml.kg-1.d-1;高剂量治疗组为颈后皮下注射EE2.5ml.kg-1.d-1及腹腔注射100mg.kg-1.d-1PDTC;低剂量治疗组为：颈后皮下注射EE2.5ml.kg-1.d-1及腹腔注射50mg.kg-1.d-1PDTC; PDTC对照组为颈后皮下注射2.5ml.kg-1.d-11,2-丙二醇及腹腔注射100mg.kg-1.d-1PDTC;连续注射共5天,于妊娠第20天处死所有大鼠。(2)、5组孕鼠均用药后采血检测血清中总胆酸(total bile acid,TBA)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平；取组织甲醛固定,旺染色观察肝组织病理学变化,免疫组化测肝组织中NF-κB p65的表达水平；Western Blot测鼠肝组织中Bsep及Ntcp蛋白表达水平。结果：①通过孕鼠TBA、ALT、AST血清检查和HE染色观察,均显示成功构建了孕鼠肝内胆汁淤积模型；②模型组孕鼠各项血清指标均增高,与正常妊娠对照组相比较,TBA、ALT、AST增加均有差异(p<0.05)；③PDTC处理阻断NF-κB高剂量治疗组与模型组比较,TBA、ALT、AST均降低(p<0.05)；④与正常妊娠对照组的肝脏比较,模型组显示出明显的形态学改变、炎症反应重,肝脏结构紊乱,而高剂量组、低剂量组较模型组好转：⑤免疫组化检测胞核中NF-κB p65表达,模型组较正常妊娠对照组及高剂量治疗组提高,有统计学差异(p<0.05);⑥Western Blot检测肝脏组织Bsep、Ntcp蛋白表达,与模型组比较,正常妊娠对照组、高剂量治疗组表达均升高,均有统计学意义(p<0.05)。结论：1.本研究结果提示用雌激素构建的SD大鼠肝内胆汁淤积模型,可能涉及NF-κB信号通路、也许通过下调Bsep/Ntcp蛋白表达影响胆汁淤积形成。2.NF-κB的特异性阻断剂PDTC能改善TBA、肝脏病理变化,提示PDTC可能对孕鼠胆汁淤积有治疗作用。3.PDTC作为特异性NF-κB抑制剂,可能通过抑制NF-κB的活性,阻断了雌激素对Bsep/Ntcp的抑制作用。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
缩略语表  10-11
前言  11-16
第一章材料和方法  16-26
  1.1 材料  16-17
  1.2 方法  17-26
第二章结果  26-33
  2.1 各组大鼠的一般情况  26
  2.2 各组大鼠血清ALT、AST、TBA水平的变化  26-27
  2.3 各组大鼠肝脏组织形态学变化  27-28
  2.4 各组大鼠肝脏NF-κB p65的免疫组化结果  28-30
  2.5 各组大鼠肝脏Ntcp、Bsep的Western Blot结果  30-33
第三章讨论  33-38
  3.1 动物模型的评价  33-34
  3.2 雌激素对肝脏生化指标及病理的变化  34
  3.3 雌激素与NF-κB的关系  34-36
  3.4 雌激素与Bsep/Ntcp表达的关系  36-38
第四章结论  38-39
参考文献  39-43
综述  43-52
  参考文献  47-52
致谢  52-53
攻读学位期间主要的研究成果目录  53

PDTC对乙炔雌二醇诱导孕鼠胆汁淤积肝脏Bsep/Ntcp表达的影响及分子机制

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