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ER、PR及HOXA-11与IVF-ET妊娠失败关系的研究

作　者: 赵华
导　师: 王兴玲
学　校: 郑州大学
专　业: 儿少卫生与妇幼保健
关键词: 体外受精—胚胎移植子宫内膜容受性同源框基因11 雌激素受体孕激素受体
分类号: R714.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

研究背景1978年,世界第一例试管婴儿诞生于英国,体外受精—胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer, IVF—ET)等辅助生殖技术的出现使不孕症的治疗呈现出革命性的提升,成为各种因素引起的不孕症治疗的最终选择。决定辅助生殖技术能否成功妊娠的主要因素包括两个方面,一是胚胎发育的质量,二是子宫内膜对胚胎的容受性。胚胎能否在宫腔内膜成功着床及着床后胎儿能否正常发育,与子宫内膜容受性关系密切,是成功受孕的重要环节之一。多年来,通过控制性超促排卵(cotrolled ovarian hyperstimulation,COH)、实验室技术的改进,胚胎数量、质量已逐步优化,而IVF-ET的周期妊娠率依然徘徊在40-50%左右,故国内外生殖医学界的学者们日益重视对子宫内膜容受性的研究。目前,国内外学者已经从内膜细胞形态学、组织学、分子生物学等各个层次针对子宫内膜容受能力做了大量研究,但这些标志物用于指导临床实践的可行性仍有待进一步的研究评估。子宫内膜可分泌各种网络状相互作用的细胞因子,共同调整内膜微环境,从而有利于胚胎着床。目前国内外对众多的生物小分子进行研究,包括白血病抑制因子(leukemia inhibitory,LIF)、血管内皮生长因子(vaseu arenothe ia growthafeto VEGF)、白细胞介素(IL)、表皮生长因子(epiderma growthafetor,EGF)).同源框基因(hemeobox genes-10,HOXA-10\hemeobox genes-11,HOXA-11)、整合素等,研究表明上述因子在指导胚胎着床方面可能起重要作用,监测其变化,可作为预测内膜容受性的标记物。深入探讨子宫内膜容受性的相关影响因素,研究各相关因素的作用机制,寻找影响IVF-ET妊娠率的因素仍是目前研究的热点。研究目的探讨行IVF-ET后不孕患者子宫内膜容受性下降的可能机制,探寻影响体外受精—胚胎移植(IVF-ET)妊娠率的相关因子,为制订改善内膜容受性、提高助孕成功率的干预措施提供依据。材料与方法选择2010年10月至2011年6月在郑州大学第三附属医院生殖中心因输卵管因素不孕拟行IVF-ET助孕的患者78例,于助孕前自然周期排卵后第5-7天(子宫内膜种植窗口期),抽空腹外周血,采用化学发光法测量血清E2和p水平；当天行微创法吸取患者少量子宫内膜组织,将其分成两组份,一份采用组织积分H-score法和免疫组化sp法对子宫内膜腺上皮和间质ER(estrogen receptor,ER)). PR (progesterone receptor,PR)及HOXA-11(hemeobox genes-11,HOXA-11)的表达进行半定量和定位分析,另一份采用半定量聚合酶链反应(reverse transcription and polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测ER.PR及HOXA-11mRNA在种植窗口期子宫内膜的表达。按助孕后是否妊娠,将78例患者分实验组(n=47)和对照组(n=31)进行比较分析。采用SPSS17.0统计分析软件进行数据分析和统计学处理,患者的年龄、各阶段生殖内分泌激素水平、子宫内膜厚度、Gn天数及剂量、获卵数、ER, PR和HOXA-11mRNA的表达等两组定量资料比较,正态分布资料采用t检验进行分析,结果用均值±标准差(x±s)表示。不孕因素、不孕类型等两组定性资料采用卡方检验采用四格表x2检验进行分析,结果用率(%)表示。以双侧a=0.05为检验水准。结果1在年龄(31.06±3.49vs29.84±2.42,P=0.09)、体重指数(22.09±2.24vs21.84±3.00,P=0.135)、不孕年限(5.49+2.32vs4.52+2.11,P=0.06)、不孕原因、不孕类型、基础状态(月经周期第2天-4天)血卵泡刺激素(follicle stimulatin ghormone,FSH,6.02±0.94vs6.35±1.27,P=0.135).黄体生成素(luteotropic hormone,LH,4.69±0.97vs4.24±1.62,P=0.135).E2(49.90±8.57vs46.36±11.92, P=0.07)水平、内膜厚度(9.22vs1.51vs9.64±1.32,P=0.22)、获卵数(10.70±3.12vs12.06±3.03,P=0.06)、促排卵药物(gonadotropin,Gn)剂量(2121.81±451.26vs.1930.69±511.99,P=0.09),实验组与对照组患者之间相比较,差异均无统计学意义。2.对照组血清种植窗口期血清E2水平高于实验组,差异无统计学意义(118.93±30.00vs.109.19±29.92,p>0.05),对照组窗口期血清P水平高于实验组,差异有统计学意义(15.04±4.13vs.12.59±2.26,P<0.001)。3.窗口期ER主要在细胞核表达,全部患者子宫内膜腺上皮和间质细胞的细胞核表达均呈阳性。对照组ER在子宫内膜腺上皮和间质细胞中阳性表达率均高于实验组,但差异无统计学意义(1.46±0.21vs.1.43±0.23,p>0.05；1.27±0.20vs.1.25±0.20,p>0.05)。4.窗口期PR主要在细胞核表达,对照组PR在腺上皮呈阴性或弱阳性表达,在间质呈强阳性表达,实验组HOXA-11在腺上皮和间质均呈阳性表达。对照组在腺上皮的表达率明显低于实验组,差异有统计学意义(0.61±0.14vs.2.59±0.22,p<0.001)；在间质的表达率明显高于实验组,差异有统计学意义(2.92+0.24vs.2.49±0.27,p<0.001)。5.窗口期HOXA-11主要在细胞质表达,对照组HOXA-11在腺上皮呈阴性或弱阳性表达,在间质呈强阳性表达；实验组HOXA-11在腺上皮和间质均呈阳性表达。对照组在腺上皮的表达率明显低于实验组,差异有统计学意义(120.55±14.85vs.150.44±12.68,p<0.001)；在间质的表达率明显高于实验组,差异有统计学意义(156.40±9.58vs.144.30±10.62,P<0.001)。6.RT-PCR实验最后经20m1／L琼脂糖凝胶电泳分析,ER.PR及HOXA-11mRNA的扩增产物和理论长度一致。结果显示：137bp处为ER目的条带,348bp处为PR目的条带,265bp处为HOXA-11目的条带,564bp处为p-actin条带。半定量测定,用目的基因与β-actin的DNA条带的灰度比值表示目的基因的相对表达水平,结果显示：对照组子宫内膜ER、PR及HOXA-11mRNA的表达均显著高于实验组,差异有统计学意义(0.48±0.03vs.0.11±0.01,p<0.001；0.62±0.06vs.0.38±0.05,P<0.001；0.36±0.02vs.0.16±0.01,P<0.001)。结论1.在种植窗口期,人血清P降低可能是引起子宫内膜容受性下降,导致IVF-ET妊娠失败的原因之一；人血清E，水平的高低与子宫内膜容受性无相关性。2.在种植窗口期,ER在人子宫内膜腺上皮和间质细胞阳性表达率的高低与子宫内膜容受性无相关性。PR在人子宫内膜腺上皮阳性表达率增高,在间质阳性表达率下降可能是引起子宫内膜容受性下降的原囚,从而导致IVF-ET妊娠的失败。3.在种植窗口期,HOXA-11在人子宫内膜腺上皮阳性表达率增高,在间质阳性表达率下降可能是引起子宫内膜容受性下降的原因,从而导致IVF-ET妊娠的失败。

全文目录

摘要  4-8
Abstract  8-13
中英文縮略词对照表  13-14
1 引言  14-16
2 材料与方法  16-25
3 结果  25-29
4 讨论  29-35
5 结论  35-36
附图  36-38
附录  38-46
参考文献  46-49
综述子宫内膜容受性标志物相关研究进展  49-67
  参考文献  61-67
致谢  67-68
个人简历及在学期间发表的论文和科研成果  68

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