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塞来昔布对非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和黏附的影响及其机制的研究

作　者: 刘晨辉
导　师: 鲍红光
学　校: 南京医科大学
专　业: 麻醉学
关键词: 塞来昔布 非小细胞肺癌 细胞增殖 细胞侵袭 胰岛素样生长因子轴 细胞黏附 CD44v6
分类号: R614
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的研究塞来昔布对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株A549增殖和侵袭的影响，并探讨其可能机制。方法1.细胞增殖实验1.1IGF-1对A549细胞增殖的影响采用随机数字表法将处于对数生长期的A549细胞分为5组：对照组（C组），10ng/mL IGF-1组（I1组），20ng/mL IGF-1组（I2组），40ng/mL IGF-1组（I3组）和80ng/mL IGF-1组（I4组）。C组细胞常规培养，I1、I2、I3和I4组细胞分别用终浓度为10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL和80ng/mL的IGF-1处理48h。MTT法检测各组细胞的增殖情况，得出IGF-1诱导A549细胞增殖的最低有效浓度。1.2塞来昔布对IGF-1诱导的A549细胞增殖的影响采用随机数字表法将处于对数生长期的A549细胞分为5组：对照组（C组），6.25μmol/L塞来昔布组（CEL1组），12.5μmol/L塞来昔布组（CEL2组），25μmol/L塞来昔布组（CEL3组）和50μmol/L塞来昔布组（CEL4组）。C组细胞采用最低有效浓度的IGF-1处理48h，CEL1、CEL2、CEL3和CEL4组细胞分别采用最低有效浓度的IGF-1联合终浓度为6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L的塞来昔布处理48h。MTT法检测各组细胞的增殖情况。2.细胞侵袭实验采用随机数字表法将处于对数生长期的A549细胞分为5组：对照组（C组），6.25μmol/L塞来昔布组（CEL1组），12.5μmol/L塞来昔布组（CEL2组），25μmol/L塞来昔布组（CEL3组）和50μmol/L塞来昔布组（CEL4组）。采用BioCoatTMMatrigel侵袭实验试剂盒检测各组细胞的跨膜侵袭情况。各组均在试剂盒的下室中加入40ng/mL的IGF-1作为诱导细胞侵袭的介质。C组细胞正常培养，CEL1、CEL2、CEL3和CEL4组细胞首先使用终浓度为6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L的塞来昔布处理32h。然后在各组试剂盒的上室中分别加入终浓度为6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L的塞来昔布，处理16h后。观察并计数各组穿膜的细胞数。3. Western Blot实验采用随机数字量表法将处于对数生长期的A549细胞分为4组：对照组（C组）、塞来昔布组（CEL组）、IGF-1组（I组）和塞来昔布联合IGF-1组（CEL+I组）。C组细胞常规培养48h，CEL组细胞采用终浓度为12.5μmol/L的塞来昔布处理48h，I组细胞采用终浓度为40ng/mL的IGF-1处理48h，CEL+I组细胞采用终浓度为12.5μmol/L的塞来昔布联合终浓度为40ng/mL的IGF-1处理48h。Western Blot法检测各组细胞p-IGF-1R和p-AKT蛋白的表达情况。4. ELISA实验采用随机数字量表法将处于对数生长期的A549细胞分为5组：对照组（C组），6.25μmol/L塞来昔布组（CEL1组），12.5μmol/L塞来昔布组（CEL2组），25μmol/L塞来昔布组（CEL3组）和50μmol/L塞来昔布组（CEL4组）。C组细胞常规培养48h，CEL1、CEL2、CEL3和CEL4组细胞使用终浓度为6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L的塞来昔布处理48h。采用IGFBP-3ActiveELISA KitTM试剂盒检测各组细胞上清液中IGFBP-3的表达量。结果（1）细胞增殖实验显示，IGF-1能够诱导A549细胞增殖，最低有效浓度为40ng/mL （P<0.05）；即使小剂量（6.25μmol/L）的塞来昔布也能够明显抑制IGF-1诱导的细胞增殖（P<0.05），且随着塞来昔布浓度的增加，抑制作用增强（P<0.05）。（2）细胞侵袭实验显示，与C组比较，CEL2、CEL3和CEL4组跨过滤膜的A549细胞数明显降低（P<0.05），且呈现剂量依赖性（P<0.05）。（3）Western blot的结果显示，40ng/mL的IGF-1能够促进A549细胞IGF-1R的磷酸化和p-AKT的表达（P<0.05），12.5μmol/L的塞来昔布能够抑制A549细胞IGF-1R的磷酸化和p-AKT的表达（P<0.05），能够抑制IGF-1诱导的IGF-1R和AKT的磷酸化（P<0.05）。（4）ELISA的结果显示，与C组比较，各处理组的上清液中IGFBP-3的表达量明显升高（P<0.05），且随着塞来昔布浓度的增加，上清液中IGFBP-3的表达量逐渐升高（P<0.05）。结论（1）IGF-1能够诱导A549细胞的增殖和侵袭，其机制可能是IGF-1促进A549细胞IGF-1R的磷酸化和AKT的磷酸化。（2）塞来昔布能够抑制IGF-1诱导的A549细胞的增殖和侵袭，其机制可能是塞来昔布能够抑制IGF-1诱导的IGF-1R的磷酸化和AKT的磷酸化。（3）塞来昔布能够抑制A549细胞的增殖和侵袭，其机制可能是塞来昔布能够抑制IGF-1R的磷酸化和AKT的磷酸化，并上调A549细胞IGFBP-3的表达。目的研究塞来昔布对非小细胞肺癌细胞株A549黏附及CD44v6表达的影响。方法采用随机数字量表法将处于对数生长期的A549细胞分为4组：对照组（C组），12.5μmol/L塞来昔布组（CEL1组）、25μmol/L塞来昔布组（CEL2组）和50μmol/L塞来昔布组（CEL3组）。C组细胞正常培养，CEL1、CEL2和CEL3组细胞分别用终浓度为12.5、25和50μmol/L的塞来昔布处理A549细胞48h。纤维连接蛋白包被法检测各组细胞的黏附率，Western blot法检测各组细胞CD44v6的表达情况。结果与C组比较，CEL1、CEL2和CEL3组A549细胞的黏附率依次降低（P<0.05），CD44v6的表达水平依次下调（P<0.05）。结论塞来昔布可以降低非小细胞肺癌细胞株A549的黏附率，其机制可能与下调CD44v6的表达有关。

全文目录


目录  4-5
缩略词表  5-6
第一部分：塞来昔布对非小细胞肺癌 A549 细胞增殖和侵袭的影响  6-36
  中文摘要  6-9
  Abstract  9-12
  前言  12-15
  材料和方法  15-25
  结果  25-31
  讨论  31-35
  结论  35-36
第二部分：塞来昔布对非小细胞肺癌 A549 细胞黏附及 CD44v6 表达的影响  36-48
  中文摘要  36-37
  Abstract  37-38
  前言  38-39
  材料和方法  39-43
  结果  43-45
  讨论  45-47
  结论  47-48
全文结论  48-49
展望和不足  49-50
参考文献  50-57
文献综述  57-70
  参考文献  64-70
攻读学位期间发表的论文  70-71
致谢  71

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 外科手术学 > 麻醉学
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