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盐酸氨溴索注射液对百草枯中毒致急性肺损伤大鼠肺表面活性物质蛋白-D的研究

作　者: 张军立
导　师: 马玉腾
学　校: 河北医科大学
专　业: 急诊医学
关键词: 百草枯急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合症肺泡Ⅱ型上皮细胞肺泡表面活性物质相关蛋白-D 盐酸氨溴索
分类号: R595.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：百草枯(paraquat，PQ)：是我国农村广泛使用一种除草剂，对人毒性极大，因无特效解毒药，故死亡率很高。目前世界上已有许多国家已禁止使用百草枯。百草枯中毒后损伤的主要脏器是肺，早期可导致急性肺损伤，晚期可致肺纤维化，患者最终出现呼吸衰竭。百草枯中毒所致急性肺损伤的发病机制还不清楚，一般认为百草枯中毒后在体内形成过多阳离子、超氧阴离子及羟自由基，诱导脂质过氧化反应，直接损害肺泡细胞，使肺泡上皮细胞分泌、合成肺泡表面活性物质减少有关。目前百草枯中毒的治疗方法主要包括洗胃、清除毒物、清除氧自由基、使用免疫抑制剂及激素，行血液透析、血液灌流。盐酸氨溴索是一种广泛应用治疗呼吸系统疾病的药物，具有祛痰功能。近年发现盐酸氨溴索还有抗炎和促进肺泡Ⅱ型细胞分泌，合成肺泡表面相关活性物质作用。SP-D是肺泡Ⅱ型细胞合成、分泌肺泡表面相关活性物质蛋白，人们发现SP-D在急性肺损伤中起着极重要作用。我们设计本实验用来观察盐酸氨溴索对大鼠百草枯中毒急性肺损伤SP-D及各相关指标的影响，并评价盐酸氨溴索对百草枯中毒治疗作用。方法：将120只体重在200-250g之间的雄性大鼠，随机分为三个实验组：（1）生理盐水组（NS组，n＝24）腹腔每日注入等容量0.9%生理盐水。（2）百草枯中毒组(PQ组，n＝48)：以30mg/㎏腹腔注入0.5%百草枯稀释液。（3）盐酸氨溴索治疗组（AT组，n=48）:百草枯染毒后每日腹腔注入盐酸氨溴索液，按40mg/㎏注入。PQ组与AT组再分别按时间点随机分为四组，分别为1d,3d,5d,7d实验组，每组均为12只。NS组也按1d,3d,5d,7d四个时间点随机分为四组，各时间点均为6只。抽取股静脉血用来检测WBC和PMN百分比。抽取股动脉血测定动脉血氧分压（PaO）。取大鼠的左肺行HE染色和免疫组化，用于观察肺组织形态学变化和SP-D在肺组织表达。右肺用western blot法检测肺组织中SP-D的含量。采用SPSS13.0统计软件进行分析，采用单因素方差分析进行组间比较，并运用均数±标准差对数据进行描述。以P﹤O.05表示有统计学意义。结果：1大鼠注射百草枯后及盐酸氨溴索治疗后表现大鼠注射百草枯后，食欲减退，呼吸急促，行动迟缓，反应迟钝，部分大鼠口、鼻有少量粘液性分泌物。百草枯中毒大鼠经盐酸氨溴索治疗后，症状减轻。NS组大鼠无异常表现。2静脉血液WBC计数和PMN百分比变化2.1静脉血液中WBC计数的变化NS组静脉血液WBC计数各时间点均无明显差异（P﹥0.05）。PQ组各相应时间点均显著高于NS组(P﹤0.01)。AT组WBC计数也增高，经盐酸氨溴索治疗后下降。但各个相应时间点仍高于NS组(P﹤0.01)，第一天AT组与PQ组无明显差异（P﹥0.05），第3、5、7天WBC计数均低于PQ组(P﹤0.01)。2.2静脉血液中PMN百分比的变化NS组PMN百分比各个时间点无明显差异（P﹥0.05）。PQ组PMN百分比第一天即开始升高，各个相应时间点与NS组相比均明显增高(P﹤0.01)。AT组第一天于PQ组无明显差异（P﹥0.05）。第5、7天明显下降(P﹤0.01)。但仍明显高于NS组各时间点(P﹤0.01)。2.3动脉血液中PaO的变化NS组动脉血液中PaO各个时间点无明显差异（P﹥0.05）。PQ组动脉血液中PaO逐渐下降，各相应时间点均明显低于NS组(P﹤0.01)。AT组PaO各相应时间点均低于NS组(P﹤0.01)。与PQ组相比：第1天两者无明显差异（P﹥0.05），第3、5、7天AT组PaO开始增高，两者相比有显著差异(P﹤0.01)。3肺组织病理形态学观察3.1肺的大体标本观察NS组肺标本色泽、大小形态正常，质地柔软，表面光滑，无出血及炎性渗出物,无充血水肿，切面无渗出物。PQ组肺标本呈暗红色，体积增大，质地韧，肺组织表面肿胀充血，部分肺叶可见点状出血，肺组织切面有浅红色液体渗出。AT组肺标本较百草枯中毒组颜色淡，充血水肿轻，部分肺叶可见点片状出血，切面有少许渗液。3.2HE染色光镜观察NS组可见肺泡结构完整，排列整齐，分布均匀，肺泡腔内无炎性细胞侵润。PQ组可见肺泡和肺间质充血水肿，肺泡间隔增厚并有中性粒细胞侵润，肺泡腔内粉红色渗液。严重时可见肺泡和肺间质充血水肿明显，部分肺泡萎陷，纤维母细胞增生，肺泡腔有大量血性渗液。AT组与PQ相比，肺泡和肺间质充血水肿均较轻。4免疫组织化学染色和western blot方法结果4.1免疫组化观察肺组织中SP-D的表达4.1.1光镜下观察SP-D在细胞膜和细胞浆中的表达。 NS组可见细胞膜和细胞浆中SP-D颗粒，PQ组SP-D在肺组织表达明显减弱。AT组在肺组织表达较PQ组增强。4.1.2NS组SP-D阳性细胞数各时间点无明显差异（P﹥0.05）。PQ组与NS组各相应时间点相比，阳性细胞数明显降低，有统计学差异(P﹤0.01)。AT组SP-D阳性细胞数各相应时间点均低于NS组有明显差异(P﹤0.01)；与PQ组相比，第1天，两者无明显差异（P﹥0.05），第3、5、7天AT组SP-D阳性细胞数各相应时间点较PQ组均增高，两者有显著差异(P﹤0.01)。4.2western blot法检测SP-D在肺组织表达NS组肺组织SP-D含量在各时间点无明显变化。PQ组肺组织SP-D含量与NS组相比，各时间点SP-D含量均明显下降，有统计学差异(P﹤0.01)。AT组肺组织SP-D含量第1、3天较PQ组相比无显著差异（P﹥0.05），经盐酸氨溴索治疗后，第5、7天两者有明显差异(P﹤0.01)。AT组较NS组有较大差异(P﹤0.01)。结论：1大鼠百草枯中毒后，静脉血WBC计数、多形核PMN百分比均明显增高，PaO2持续下降，说明百草枯中毒诱导炎症反应引起急性肺损伤主要因素之一。2通过免疫组化和Western blot法，发现百草枯中毒后SP-D在肺组织表达减弱，肺组织SP-D含量也明显降低，说明百草枯中毒肺泡表面活性物质合成减少，在百草枯中毒所致急性肺损伤中起重要作用。3经盐酸氨溴索治疗后，百草枯中毒大鼠WBC计数、PMN百分比均明显降低，PaO2升高，SP-D在肺组织表达增强，肺组织SP-D含量也逐渐升高，证明盐酸氨溴索具有抗炎及促进肺泡Ⅱ型细胞表面相关活性物质合成与分泌，对百草枯的治疗有效果。

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摘要  4-8
ABSTRACT  8-13
英文缩写  13-14
前言  14-15
材料与方法  15-21
结果  21-25
附图  25-32
附表  32-34
讨论  34-37
结论  37-38
参考文献  38-41
综述肺表面活性物质相关蛋白-D(SP-D)的研究进展  41-52
  参考文献  47-52
致谢  52-53
个人简历  53

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