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UT-B基因敲除小鼠免疫功能的研究

作　者: 朱娟娟
导　师: 曾芸
学　校: 广西大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 尿素通道蛋白B 脾脏 淋巴细胞亚群 免疫功能 抗肿瘤
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


本研究以尿素通道蛋白B(Urea Transporter B, UT-B)基因敲除小鼠(UT-B-/-)和UT-B野生型小鼠(WT)为实验对象,探讨UT-B基因对小鼠免疫功能的影响。采用基因鉴定法筛选UT-B基因敲除小鼠和UT-B野生型小鼠70只,分两组进行试验。第一组各取UT-B基因敲除小鼠和UT-B野生型小鼠15只,分别用于检测脾脏UT-B蛋白的表达、免疫器官指数的测定、小鼠脾脏淋巴细胞转化实验以及流式分析脾脏和外周血中淋巴细胞分群情况。第二组取UT-B基因敲除小鼠和UT-B野生型小鼠各20只进行荷瘤试验和肿瘤组织形态学观察。蛋白免疫印迹(Western-blot)试验结果表明,UT-B基因敲除小鼠脾脏不表达UT-B蛋白,UT-B野生型小鼠脾脏表达分子量为41-54KD的UT-B蛋白。脾脏指数检测得出UT-B基因敲除小鼠脾脏指数为2.76,UT-B野生型小鼠脾脏指数为3.71,UT-B基因敲除小鼠脾脏指数显著低于UT-B野生型小鼠(P<0.01)。脾脏淋巴细胞转化实验中刀豆蛋白A(ConA)刺激的UT-B基因敲除小鼠和UT-B野生型小鼠的脾脏淋巴细胞转化率分别为2.7和1.8(P＜0.01)；脂多糖(LPS)刺激的UT-B基因敲除小鼠和UT-B野生型小鼠的脾脏淋巴细胞转化率分别为3.62和3.22(P＜0.01)；UT-B基因敲除小鼠脾脏淋巴细胞转化率显著高于UT-B野生型小鼠(P＜0.01)。流式检测结果表明,UT-B基因敲除小鼠的CD4+T细胞,CD8+T细胞数量分别比野生型小鼠多15.18%(P＜0.01)和3.16%(P＞0.05),UT-B基因敲除小鼠B细胞数量低于WT小鼠(P＞0.05)。负荷前列腺肿瘤试验的抑瘤率为55.1%,UT-B基因敲除小鼠和UT-B野生型小鼠荷瘤后脾脏指数分别为4.7和4.3,两者相比差异不显著(P＞0.05)；UT-B基因敲除小鼠荷瘤后脾脏和外周血中CD4+T和T细胞数量分别比UT-B野生型小鼠高30.71%(P＜0.01)和37.45%(P＜0.01)。肿瘤组织石蜡切片HE染色形态学观察结果显示UT-B野生型荷瘤小鼠肿瘤组织石蜡切片中肿瘤细胞排列紧密,坏死较少、异型性明显、坏死区少量淋巴细胞浸润；UT-B基因敲除荷瘤小鼠肿瘤组织石蜡切片中肿瘤细胞排列紊乱,坏死较多,异型性不明显,癌细胞核固缩,坏死区有大量淋巴细胞浸润。以上结果可以得出如下推断：UT-B基因的敲除增加了小鼠脾脏和外周血中发挥免疫功能的CD4+T细胞和T细胞的数量,增强了小鼠的细胞免疫功能,起到抑制肿瘤的作用；UT-B基因与机体淋巴组织对T淋巴细胞的选择性发育、分化以及肿瘤的发生和发展密切相关。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
常用缩略词  9-13
第一章 文献综述  13-21
  1.1 尿素通道蛋白简介  13-16
    1.1.1 尿素通道蛋白的发现  13
    1.1.2 尿素通道蛋白的基因学特征  13-14
    1.1.3 尿素通道蛋白的组织分布和表达  14
    1.1.4 UT-B蛋白结构特点  14-15
    1.1.5 UT-B蛋白的生理学意义  15-16
  1.2 免疫功能的评价指标  16-18
  1.3 尿素通道蛋白UT-B基因与小鼠脾脏的研究  18-19
  1.4 本课题的研究意义  19-21
第二章 材料和方法  21-38
  2.1 实验材料  21-25
    2.1.1 实验动物  21
    2.1.2 实验仪器  21-22
    2.1.3 实验主要试剂  22-23
    2.1.4 溶液的配制  23-25
  2.2 实验方法  25-37
    2.2.1 UT-B基因敲除小鼠和野生型小鼠的繁殖与鉴定  25-26
      2.2.1.1 动物的繁殖  25-26
      2.2.1.2 基因型的鉴定  26
    2.2.2 Western blot检测小鼠脾脏中UT-B蛋白的表达  26-30
      2.2.2.1 红细胞膜蛋白和脾脏总蛋白的提取及含量测定  26-28
      2.2.2.2 SDS-PAGE凝胶电泳  28-29
      2.2.2.3 转膜  29-30
    2.2.3 UT-B基因敲除小鼠和野生型小鼠免疫器官指数的测定  30-31
    2.2.4 流式检测小鼠脾脏和外周血中淋巴细胞亚群比例  31-32
    2.2.5 野生型小鼠和UT-B基因敲除小鼠脾脏淋巴细胞转化实验  32-33
      2.2.5.1 小鼠脾细胞悬液的制备  32-33
      2.2.5.2 淋巴细胞增殖反应  33
    2.2.6 荷瘤实验  33-35
      2.2.6.1 RM-1前列腺癌细胞的复苏和培养  33-34
      2.2.6.2 细胞培养和形态学观察  34
      2.2.6.3 荷瘤实验所需细胞悬液的制备  34
      2.2.6.4 荷瘤模型的建立  34-35
      2.2.6.5 荷瘤实验步骤  35
      2.2.6.6 流式检测荷瘤小鼠脾脏和外周血淋巴细胞亚群  35
    2.2.7 荷瘤小鼠肿瘤组织形态学观察  35-37
  2.3 统计学分析  37-38
第三章 结果与分析  38-51
  3.1 WT和UT-B-/-小鼠的繁殖与鉴定  38-39
  3.2 Western blot检测小鼠脾脏中UT-B蛋白的表达  39
  3.3 WT和UT-B-/-小鼠免疫器官指数的测定  39-40
  3.4 流式检测WT和UT-B-/-小鼠脾脏和外周血中淋巴细胞亚群比例  40-43
  3.5 WT和UT-B-/-小鼠脾脏淋巴细胞转化实验  43
  3.6 荷瘤实验  43-49
    3.6.1 荷瘤小鼠的状态观察  43-44
    3.6.2 抑瘤率  44-45
    3.6.3 WT和UT-B-/-小鼠荷瘤后体重动态变化  45
    3.6.4 荷瘤小鼠脾重,脾脏指数和胸腺指数的变化  45-46
    3.6.5 流式检测荷瘤小鼠脾脏和外周血中淋巴细胞亚群比例  46-49
  3.7 荷瘤小鼠肿瘤组织形态学观察  49-51
    3.7.1 WT荷瘤小鼠肿瘤组织形态学观察  49
    3.7.2 UT-B-/-荷瘤小鼠肿瘤组织形态学观察  49-51
第四章 讨论  51-58
  4.1 UT-B基因对小鼠外周血和脾脏淋巴细胞亚群的影响  51-52
  4.2 UT-B基因对小鼠脾脏淋巴细胞转化的影响  52-53
  4.3 UT-B基因对小鼠细胞免疫的影响  53-54
  4.4 UT-B基因对小鼠肿瘤免疫的影响  54-55
  4.5 UT-B基因与肿瘤免疫的机制探讨  55-56
  4.6 UT-B基因的研究展望  56-58
第五章 结论  58-59
参考文献  59-65
致谢  65-66
攻读学位期间发表的学术论文  66

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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