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抗S.aureus TRAP蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位分析

作　者: 周雪
导　师: 崔玉东
学　校: 黑龙江八一农垦大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 金黄色葡萄球菌 RNAIII活化蛋白的靶蛋白单克隆抗体抗原表位
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S.aureus)为革兰氏阳性致病菌，常引起人和动物感染。随着抗生素使用，耐药性菌株不断出现，使S.aureus感染难以治疗。因此，人们对S.aureus感染的研究重点从治疗转向免疫预防，S.aureus许多菌体蛋白便成为疫苗研制的主要候选对象。TRAP蛋白为葡萄球菌所特有，并且是一种免疫保护作用较为理想的疫苗候选蛋白，但其在细胞的定位和具体功能还不十分清楚。本研究制备了抗TRAP单克隆抗体，并用单克隆抗体研究了其对应表位，为表位疫苗研制、TRAP蛋白定位及其生物功能研究提供依据。用重组TRAP蛋白免疫BALB/c小鼠，以杂交瘤技术制备并筛选出11株能够稳定分泌抗TRAP抗体的细胞株，分别命名为2A1、3A6、3B1、1B4、2C5、4C7、5C3、2D8、2A7、3A1、1C4；经McAbs亚类检测，其中2A1、3A6、3B1、1B4、2C5、4C7、5C3、2D8的重链为IgG1型，2A7、3A1、1C4的重链为IgM型；所有McAbs的轻链均为κ链；用Western blot检测8株IgG1型杂交瘤细胞上清，都能与TRAP蛋白有特异性结合；通过交叉性和亲和性ELISA试验证明McAbs特异性良好且亲和能力较强。分别以8株McAbs为配基，经噬菌体展示技术筛选和间接ELISA检测，得到与对应单抗亲和性高的噬菌体克隆，经测序及生物信息学分析后共得到3个表位，其中2A1、2C5、4C7针对同一表位，氨基酸序列为YLYP；3A6、3B1、5C3、2D8针对同一表位，氨基酸序列为SYFE；1B4与TRAP同源性不高，氨基酸序列为不连续的L-G-L，但该单抗与TRAP蛋白的结合力很强，可能是模拟表位；经调理吞噬实验证实，2A1、3A6、1B4三株代表单抗都有很强的调理活性；用制备的单抗对S.aureus株Wood46进行全菌体ELISA检测证实，3个表位部分均暴露在菌体表面。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-8
第一章前言  8-16
  1.1 TRAP 蛋白研究进展  8-12
  1.2 抗原表位研究方法概况  12-14
  1.3 噬菌体展示技术  14-15
  1.4 研究目的和意义  15-16
第二章单克隆抗体的制备  16-30
  2.1 材料  16-17
  2.2 方法  17-23
  2.3 结果  23-30
第三章抗原表位的筛选  30-43
  3.1 材料  30-31
  3.2 方法  31-34
  3.3 结果  34-43
第四章讨论  43-45
第五章结论  45-46
参考文献  46-50
致谢  50-51
附录  51-55
作者简历  55

抗S.aureus TRAP蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位分析

内容摘要

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