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弗氏不完全佐剂加BCG热休克蛋由65对大鼠关节炎的诱导

作　者: 周蕾
导　师: 王丽颖
学　校: 吉林大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 类风湿关节炎 热休克蛋白65 弗氏佐剂 抑制性ODN 自身免疫
分类号: R392.11
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种常见的以全身多关节慢性滑膜炎症为主要表现的自身免疫性疾病，常伴有关节软骨损伤和骨破坏，致残率高。为深入研究RA的发病机制及开发治疗药物，自身免疫性关节炎动物模型是必不可少的工具。佐剂诱导的关节炎（adjuvant induced arthritis，AIA）是目前常用的关节炎动物模型，其发病机制与病理改变类似于人类RA。弗氏完全佐剂（complete Freund’s adjuvant，CFA）常用于AIA模型的诱导，其中卡介苗（Bacille Calmette Guerin，BCG）来源的结核分枝杆菌热休克蛋白65（heat-shock protein65，HSP65）可通过分子模拟参与人类RA和AIA的发病过程。基于此，本研究采用BCG HSP65代替CFA中的BCG成分，与IFA乳化混合，配制HSP65-IFA乳化液，用于诱导大鼠关节炎的研究。我们发现，HSP65-IFA可诱导大鼠产生类似于CFA诱导的AIA病变，表现出足爪肿胀、踝关节滑膜增生、血管翳形成和软骨侵蚀。此模型优于AIA之处在于有抗双链DNA抗体的产生，说明HSP65-IFA诱导的关节炎是一种自身免疫性疾病。我们进一步发现，HSP65的剂量对HSP65-IFA诱导的大鼠关节炎有显著影响，剂量太高或太低均不利于其诱导关节炎发生。鉴于我们所使用的HSP65蛋白是由大肠杆菌系统表达的重组蛋白，其中含有6×his-tag标签，还可能含有残余的大肠杆菌LPS，为排除这两个因素在HSP65-IFA诱导的关节炎中的作用，我们选择同样为大肠杆菌表达系统所表达且带有6×his-tag标签的蛋白VP1，和非大肠杆菌系统表达、不带有6×his-tag标签的卵白蛋白（ovalbumin，OVA）作为无关蛋白参照，分别与IFA乳化混和后观察其是否能诱导大鼠关节炎的发生。我们发现，VP1和OVA并不能像HSP65那样有效地诱导大鼠发生自身免疫性关节炎，因此HSP65-IFA对大鼠关节炎的诱导作用与HSP65蛋白的性质有关，而与其残留的LPS和6×his-tag标签无关。随后，我们将抑制性ODN SAT05f应用于治疗HSP65-IFA或CFA诱导的大鼠关节炎，发现SAT05f能减轻HSP65-IFA诱导的大鼠足肿胀、踝关节病理改变和抗dsDNA抗体的产生，而对CFA诱导的大鼠关节炎没有治疗作用。综上所述，HSP65-IFA可用于诱导大鼠自身免疫性关节炎模型，SAT05f具有治疗RA的潜在应用价值。

全文目录


提要  4-6
中文摘要  6-9
Abstract  9-14
英文缩写词表  14-16
前言  16-39
  1 类风湿性关节炎  16-30
    1.1 类风湿性关节炎的发病机制  16-21
    1.2 类风湿性关节炎的治疗概况  21-27
    1.3 自身免疫性关节炎动物模型研究进展  27-30
  2 热休克蛋白  30-35
    2.1 热休克蛋白的分类  31
    2.2 热休克蛋白的生物学作用  31-32
    2.3 热休克蛋白激发免疫反应的机制  32-33
    2.4 热休克蛋白与自身免疫病  33-35
  3 抑制性 ODN  35-39
材料方法  39-45
  1 主要材料  39-40
    1.1 实验动物  39
    1.2 试剂和仪器  39-40
  2 实验方法  40-45
    2.1 大鼠关节炎的诱导  40-41
    2.2 关节炎大鼠踝关节病理分析  41-42
    2.3 ELISA 检测大鼠血清中抗体水平  42-43
    2.4 统计学分析  43-45
实验结果  45-69
  1 HSP65-IFA 诱导大鼠自身免疫性关节炎  45-58
    1.1 模型大鼠性别选择  45-46
    1.2 HSP65-IFA 对大鼠关节炎的诱导作用  46-52
    1.3 不同剂量 HSP65 对 HSP65-IFA 诱导的关节炎的影响  52-58
  2 VP1/OVA-IFA 对大鼠关节炎的诱导作用  58-63
    2.1 VP1/OVA-IFA 对大鼠足体积的影响  59-60
    2.2 VP1/OVA-IFA 对大鼠踝关节病理改变的影响  60-61
    2.3 VP1/OVA-IFA 对关节炎大鼠体重的影响  61-62
    2.4 VP1/OVA-IFA 对关节炎大鼠产生抗体的影响  62-63
  3 SAT05f 对大鼠关节炎的治疗作用  63-69
    3.1 SAT05f 对关节炎大鼠足体积的影响  63-64
    3.2 SAT05f 对关节炎大鼠踝关节病理改变的影响  64-66
    3.3 SAT05f 对关节炎大鼠体重的影响  66-67
    3.4 SAT05f 对关节炎大鼠抗 HSP65 抗体产生的影响  67
    3.5 SAT05f 对关节炎大鼠抗 dsDNA 抗体产生的影响  67-69
讨论  69-75
  1 HSP65-IFA 诱导的大鼠关节炎的评价  69-72
    1.1 关节炎大鼠的足体积、病理改变和抗体水平  69-70
    1.2 T 细胞的作用  70-71
    1.3 自身抗体和细胞因子的作用  71-72
  2 热休克蛋白与自身免疫病  72-74
  3 抑制性 ODN 对大鼠关节炎的治疗作用  74-75
结论  75-77
参考文献  77-91
个人简历及学术成果  91-93
致谢  93

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学 > 免疫生物学 > 免疫分子生物学（免疫化学）
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