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HMGB1对RA患者成纤维样滑膜细胞增殖及IL-6、IL-8、MMP-3表达的影响

作　者: 龚震
导　师: 左晓霞
学　校: 中南大学
专　业: 风湿免疫学
关键词: 滑膜细胞组织块培养法 LPS HMGB1 IL-6 IL-8 MMP-3 RA 细胞分泌复合物细胞因子细胞增殖不同浓度协同刺激炎症反应 Vimentin 类风湿关节炎蛋白原代培养 arthritis
分类号: R593.22
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的探讨高迁移率族蛋白1(High mobility group box 1 protein, HMGB1)对类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)患者成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLS)体外增殖情况及其对IL-6、IL-8、MMP-3表达的影响。方法收集在我院行关节置换或关节镜手术的RA患者的滑膜,采用消化酶培养法和组织块培养法进行成FLS的原代培养,并传代至3-6代用于实验,免疫细胞化学检测Vimentin鉴定FLS。分别使用不同浓度HMGB1 (100、500、2000ng/ml)、LPS (100 ng/ml)、IL-1β(0.5 ng/ml)、HMGB1/IL-1β复合物(100/0.5、500/0.5、2000/0.5 ng/ml)及HMGB1/LPS复合物(100/100、500/100、2000/100 ng/ml)刺激FLS。用CCK-8法检测FLS的增殖情况,ELISA法检测细胞上清中IL-6、IL-8、MMP-3的浓度。结果本实验共取RA膝关节滑膜标本12例,原代培养15次,成功8次,其中用消化酶培养法10次,成功4次；组织块培养法5次,成功4次。细胞传至第三代时,Vimentin染色及光镜证实为FLS。TNF-α刺激12h、24h、48h后FLS增殖较对照组明显增高；不同浓度HMGB1 (100、500、2000ng/ml)单独刺激0、3、6、12、24、48h,FLS体外增殖差异无统计学意义,IL-1β、HMGB1/IL-1β复合物、LPS、HMGB1/LPS复合物组在不同时间点所测FLS增殖程度差异无统计学意义。各组在刺激6h、24h、48h后FLS增殖情况与对照组比较,差异无统计学意义。小剂量HMGB1不能刺激FLS分泌IL-6,大剂量(2000ng/ml)可显著刺激FLS分泌IL-6; IL-1β和LPS不能促进FLS分泌IL-6,但HMGB1与0.5ng/ml的IL-1β或100ng/ml的LPS共刺激FLS可促进IL-6的分泌,且呈剂量依赖性。不同浓度的HMGB1、IL-1p和LPS不能刺激FLS分泌IL-8；但HMGB1与IL-1β或LPS共刺激FLS可促进IL-8的分泌,且呈剂量依赖性。不同浓度的HMGB1、IL-1β和LPS不能刺激FLS分泌MMP-3；但HMGB1与IL-1β或LPS协同刺激FLS可促进MMP-3的分泌,且呈剂量依赖性。结论本研究显示,HMGB1在体外单独作用于FLS时,无或仅有少量促炎因子的活性,HMGB1与IL-1β, LPS组成的复合物有明显的促炎因子活性,可显著增加FLS IL-6、IL-8及MMP-3的释放。HMGB1及其与IL-1β, LPS的复合物在体外对FLS的增殖无明显影响。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-10
英文缩略词简表  10-11
前言  11-13
第一部分: 类风湿关节炎FLS的分离培养及鉴定  13-21
  材料与方法  13-17
  结果  17-19
  讨论  19-20
  结论  20-21
第二部分: HMGB1对FLS增殖的影响  21-29
  材料与方法  21-23
  结果  23-27
  讨论  27-28
  结论  28-29
第三部分: HMGB1对FLS分泌IL-6、IL-8及MMP-3的影响  29-38
  材料与方法  29-31
  结果  31-35
  讨论  35-37
  结论  37-38
参考文献  38-40
综述 HMGB1与类风湿关节炎  40-56
  参考文献  50-56
致谢  56-57
已发表论文及参与科研项目  57

HMGB1对RA患者成纤维样滑膜细胞增殖及IL-6、IL-8、MMP-3表达的影响

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