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日本血吸虫40kDa热休克蛋白（SjHSP40）的免疫学功能研究

作　者: 李莎莎
导　师: 苏川
学　校: 南方医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 日本血吸虫 sjHSP40 免疫学功能 特异性抗体 CD4~+T淋巴细胞
分类号: R383.24
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：构建PGEX-6P-1-SjHSP40(SjHSP40)融合表达载体并在大肠埃希菌(Escherich coli内进行原核表达及重组蛋白纯化,初步探讨SjHSP40的免疫学功能。方法：首先,对SjHSP40进行生物信息学分析,以PCR方法扩增SjHSP40基因片段,将其克隆入原核表达质粒pGEX-6P-1,经测序验证后转化入E. coli BL-21(DE3)中。随后,重组蛋白经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后以Glutathione-Sepharose4B亲和柱进行纯化,所得产物GST-SjHSP40融合蛋白进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot鉴定。最后,将此融合蛋白免疫Balb/c小鼠后,以ELISA法检测血清中SjHSP40特异性抗体水平(IgG及其亚型IgG1和IgG2a),并以流式细胞术通过体内外实验观察SjHSP40对CD4+T淋巴细胞分化(包括Th1、Th2、Th17和Treg细胞)的动态变化。结果：对SjHSP40进行生物信息学分析发现,SjHSP40的氨基酸序列与曼氏血吸虫的同系物相似性最高,序列一致性达到86%,与人、小鼠HSP40的氨基酸序列一致性分别为37%和39%,SjHSP40含有7个潜在的B细胞表位及多个T细胞表位。测序结果表明,本研究成功构建了pGEX-6P-1-SjHSP40原核表达载体,经IPTG诱导表达出融合蛋白GST-SjHSP40。Western blot结果显示该融合蛋白能被抗GST抗体特异性识别。ELISA检测表明,与GST等对照组相比,此融合蛋白免疫小鼠血清中抗原特异性IgG及其亚型IgGl和IgG2a水平均显著升高。通过体内外实验,运用流式细胞术检测显示,与GST等对照组相比,本实验中未见SjHSP40对CD4+T淋巴细胞分化的具有明显影响。结论：本实验中SjHSP40可诱导免疫小鼠血清中高水平的特异性IgG,包括其亚型IgG1和IgG2a,但对CD4+T淋巴细胞的分化(包括Thl、Th2、Th17和Treg细胞)却未见明显影响。

全文目录


主要英文缩写词  5-7
中文摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
前言  11-15
材料和方法  15-40
结果  40-60
讨论  60-65
总结  65-66
参考文献  66-71
综述  71-79
  参考文献  76-79
攻读学位期间发表文章情况  79-80
致谢  80

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学寄生虫学 > 医学蠕虫学 > 吸虫 > 血吸虫
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