学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

布鲁氏菌VirB及GntR在胞内生存中的研究

作　者: 高光俊
导　师: 徐兴然; 陈泽良
学　校: 西南大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 布鲁氏菌 VirB GntR 代谢通路 致病机理
分类号: R378.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 1次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


布鲁氏菌病是由布氏杆菌(Brucella)这种胞内寄生菌引起的一种全球性的人畜共患的传染性疾病,给全世界人类健康和农牧业生产带来了巨大的。编码布鲁氏菌毒力因子VirB与调控因子GntR的基因是布鲁氏菌中最为重要的基因之一在抵御宿主的免疫杀伤作用,并最终建立和维持胞内生存过程中发挥了重要的作用。但其具体的致病机制或调控机理方面还存在着众多的疑问。为此,深入研究和认识VirB与GntR在布鲁氏菌胞内感染以及相关的代谢通路,对正确揭示布鲁氏菌的胞内生存机制、致病机理方面具有十分重要的作用,为新疫苗和治疗药物研究方面提供了坚实的理论依据,在布鲁氏菌防控工作方面也将起到十分重要的指导意义。在相关研究的基础上,本文主要采用抗性替换的原理来构建VirB与GntR缺失株。本研究以验证后的缺失株16M△virB.16M△gntR为研究材料,对布鲁氏菌毒力表型、布鲁氏菌胞内环境适应性方面对其进行了相关的分析,并在相关毒力研究与分析的基础上,对其所相关的调控网络和代谢通路,进行了深入的研究。本研究成功地构建了布鲁氏菌VirB与GntR的缺失株.virB与gntR基因缺失,virB缺失导致菌株生长速度减慢,极大地影响了布鲁氏菌的生存。体外模拟巨噬细胞的胞内环境适应性分析表明；体外胁迫胁下的应激实验发现VirB.GntR突变株在多种胁迫环境中的生存能力均降低,表明VirB,GntR有利于布鲁氏菌抵抗各种恶劣环境。布鲁氏菌多种重要基因的转录学分析布鲁氏菌VirB.GntR在布鲁氏菌毒力、体外应激以及相关调控方面具有十分重要的作用。重要调控因子GntR在布鲁氏菌生物素合成过程中发挥了十分重要的作用,是布鲁氏菌生物素合成过程中的主要调控因子。以上布鲁氏菌毒力、体外适应性分析、转录学等多种实验结果表明：VirB. GntR在布鲁氏菌胞内生存、毒力的发挥以及代谢通路网络方面居于十分关键的的位置,在布鲁氏菌的致病机理和感染建立方面发挥了十分重要的作用。本课题就VirB及GntR两种重要的毒力(调控)因子布鲁氏菌在宿主机体和胞内生存中的的有关作用机理进行了深入的研究,对其进行了一个全新的认识,布鲁氏菌胞内生存机制的理解以及布鲁氏菌胞内生存相关的分子机制的理解,为以后布鲁氏菌慢性感染的建立等复杂机理提供了重要线索,为布鲁氏菌疫苗或药物靶点的开发提供了新的线索,同时也为布鲁氏菌有效的防控提供了坚实的基础。

全文目录


摘要  6-7
ABSTRACT  7-9
第一章 文献综述  9-25
  1.1 布鲁氏菌病原学  9-10
  1.2 布鲁氏菌病流行概况  10-11
  1.3 布鲁氏菌病危害及流行  11-13
  1.4 布鲁氏菌毒力系统  13-15
    1.4.1 BvrR-BvrS双组分系统(TCS)  13-14
    1.4.2 密度感应系统(QS)  14
    1.4.3 脂多糖(LPS)  14
    1.4.4 应激反应蛋白  14-15
    1.4.5 布鲁氏菌外膜蛋白  15
  1.5 转录调控因子  15-16
  1.6 生物素及其代谢通路  16-18
  1.7 细菌分泌系统  18-19
  1.8 布鲁氏菌四型分泌系统(T4SS)  19-20
  1.9 布鲁氏菌病传染与免疫研究  20-21
  1.10 布鲁氏菌组学研究  21
  1.11 布鲁氏菌病诊断  21-22
  1.12 布鲁氏菌病防控技术  22
  1.13 布鲁氏菌防控研究  22-23
  1.14 布鲁氏菌病临床治疗研究  23-25
第二章 引言  25-27
第三章 布鲁氏菌16M virB缺失株(16MΔvirB)的构建  27-39
  3.1 材料  27-29
    3.1.1 菌株和质粒  27
    3.1.2 引物  27-28
    3.1.3 主要试剂  28
    3.1.4 主要仪器  28-29
  3.2 方法  29-33
    3.2.1 运用抗性替换法构建缺失突变质粒  29-31
    3.2.2 布鲁氏菌16M virB突变株(16MΔvirB)的构建  31-32
    3.2.3 突变株16MΔvirB中virB转录水平的验证  32-33
  3.3 结果  33-37
    3.3.1 同源臂及Kana抗性目的片段的扩增  33-34
    3.3.2 突变盒NKC的构建  34-35
    3.3.3 PMD18T-NKC缺失突变载体的构建  35
    3.3.4 VirB突变株(16MΔvirB)的构建和筛选  35-36
    3.3.5 16MΔvirB中virB转录水平的验证  36-37
  3.4 讨论  37-39
第四章 布鲁氏菌16MΔvirB胞内生存的研究  39-49
  4.1 材料  39-40
    4.1.1 菌株和质粒  39
    4.1.2 引物  39
    4.1.3 主要试剂  39-40
    4.1.4 主要仪器  40
    4.1.5 试验动物  40
  4.2 方法  40-42
    4.2.1 布鲁氏菌16M gntR突变株(16MΔgntR)的毒力表型试验  40-41
    4.2.2 16MΔvirB突变株部分重要基因的RT-PCR验证  41-42
  4.3 结果  42-46
    4.3.1 16MΔvirB突变株的毒力表型分析  42-45
    4.3.2 毒力基因Omp32/25、DnaK、VjbR、GntR在16MΔvirB缺失株中的转录分析  45-46
  4.4 讨论  46-49
第五章 GntR在布鲁氏菌胞内生存中的作用研究  49-63
  5.1 材料  49-50
    5.1.1 菌株和质粒  49
    5.1.2 引物  49-50
    5.1.3 主要试剂  50
    5.1.4 主要仪器  50
    5.1.5 试验动物  50
  5.2 方法  50-53
    5.2.1 布鲁氏菌gntR突变株(16MΔgntR)的构建  50-51
    5.2.2 布鲁氏菌gntR突变株(16MΔgntR)的毒力表型试验  51-52
    5.2.3 VirB及GntR在布鲁氏菌胞内生存过程中的转录学分析  52-53
  5.3 结果  53-61
    5.3.1 布鲁氏菌gntR突变株(16MΔgntR)的构建及鉴定  53-55
    5.3.2 布鲁氏菌16MΔgntR的毒力表型分析  55-58
    5.3.3 VirB、GntR在布鲁氏菌在生物素代谢及毒力调控过程中的转录学分析  58-61
  5.4 讨论  61-63
第六章 研究总结与创新点  63-65
参考文献  65-73
附录  73-75
致谢  75-77
发表论文情况  77

相似论文

  1. 羊种布鲁氏菌16M优势蛋白抗原的鉴定,S852.61
  2. 家畜布鲁氏菌病流行病学调查及布鲁氏菌单核苷酸多态性分子分型研究,S855.12
  3. 抗菌肽Shiva-1a基因在杆状病毒中表达及山羊转基因核供体细胞的制备,S827
  4. 生鲜牛奶中布鲁氏菌和单增李斯特菌双重PCR检测与汉中市四种动物疫病免疫抗体的检测,R155.5
  5. 水稻纹枯病菌毒素致病机理研究及六种杀菌剂对纹枯病菌的毒力测定,S435.111.42
  6. 斜纹夜蛾幼虫表皮对莱氏野村菌侵染的防御功能研究,S476.12
  7. FTH1在B.ovis 019株侵染小鼠巨噬细胞中的功能研究,S852.61
  8. 魔芋软腐病发病机理及药物防治技术研究,S436.32
  9. 猪圆环病毒2型感染猪肺泡巨噬细胞的蛋白质组学研究,S858.28
  10. 柑桔园链格孢菌的鉴定与防治,S436.66
  11. 用最短路径传递共表达预测拟南芥基因功能,Q943.2
  12. 重组红火蚁毒素蛋白SoliⅣ致病机理的初步研究,R384
  13. 隐孢子虫感染对奶牛免疫机能及抗氧化体系影响的研究,S858.23
  14. 光滑型布鲁氏菌LPS单克隆抗体的制备及竞争ELISA方法的建立,S854.43
  15. 松材线虫枯萎病疫木上的蓝变菌研究,S763
  16. 基于基因本体（GO）的基因语义相似性度量方法的研究及应用,TP399-C8
  17. 辣椒疫霉菌遗传多样性分析及致病机理研究,S436.418
  18. 阿尔茨海默病的发病机理研究,R749.16
  19. 强的松与促皮质素药物致婴幼期脑损伤的实验性研究,R725.9
  20. 新城疫病毒HN蛋白在病毒毒力和组织嗜性中的作用,S852.65
  21. 基于KEGG的代谢通路最短路径问题的研究,TP399-C8

中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 病原细菌 > 流产菌属（布鲁氏（Bruce）杆菌）
© 2012 www.xueweilunwen.com