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S100A16促进脂质形成及分子机制的研究

作　者: 张日华
导　师: 赵子建
学　校: 南京医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: S100A16 前体脂肪细胞 脂肪细胞
分类号: R363
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


肥胖日益成为严重影响人们健康和生活质量最常见的慢性疾病之一，给社会带来了沉重的负担。因此，进一步明确其发生发展的分子机制并筛查新的药物靶标对于控制肥胖及其并发症有着重要意义。S100A16属于S100家族的新成员，是一种小分子酸性Ca2+结合蛋白。S100A16蛋白广泛低表达于全身各组织，在食管组织中表达较高、其次是脂肪和结肠组织，在肝脏中表达较低。S100A16蛋白高表达于多种肿瘤组织。在我们的前期研究中，基因芯片筛查不同分化程度的脂肪细胞内多种基因的表达差异，结果显示，随着脂肪细胞分化程度的减弱，S100A16表达下调。因此，我们推测S100A16与脂肪细胞分化密切相关，并采用细胞与动物模型探讨S100A16对脂肪细胞分化和肥胖的作用以及分子机制。首先，我们以小鼠胚胎成纤维细胞系3T3-L1为模型，研究S100A16对脂质形成的作用及机制。其次，我们构建了四种小鼠模型：全身高表达S100A16的转基因小鼠（S100A16Tg-/+）、脂肪组织特异性高表达S100A16的转基因小鼠（aP2-S100A16Tg-/+）、全身敲除S100A16的基因敲除小鼠（S100A16KO+/-）、脂肪组织特异性敲除S100A16的基因敲除小鼠（Fabp-S100A16KO+/-），以研究在体内，S100A16对脂肪形成和胰岛素抵抗的作用。再者，分离原代小鼠胚胎成纤维细胞MEF，在此原代细胞模型基础上，进一步深入研究S100A16影响脂质形成的分子机制。S100A16促进脂肪细胞形成，上调脂肪细胞标志基因表达，促进前体脂肪细胞增值。S100A16促使成熟脂肪细胞的胰岛素刺激的葡萄糖摄取明显受到抑制，胰岛素刺激的信号转导通路也明显下调。S100A16与p53可能是间接结合，进而影响其功能，而S100B起到中介作用。因此，我们认为，S100A16是一种全新的促脂肪细胞生成因子。

全文目录


中文摘要  5-6
外文摘要  6-7
前言  7-10
1. 材料与方法  10-21
  1.1 试剂与药品  10-11
  1.2 主要仪器和设备  11-12
  1.3 脂肪细胞分化模型  12-14
  1.4 组织和细胞总蛋白质的提取以及Western Blot检测  14
  1.5 提取总RNA，反转录为cDNA，及RT-PCR以及Q-PCR  14-15
  1.6 S100A16高表达质粒的构建  15-16
  1.7 S100A16干扰质粒的构建  16-17
  1.8 细胞转染及稳定细胞株的筛选  17
  1.9 细胞内Akt蛋白磷酸化测定  17
  1.10 免疫共沉淀  17-18
  1.11 His-pull down  18-19
  1.12 细胞增殖实验  19
  1.13 胰岛素刺激的葡萄糖吸收实验  19
  1.14 提取鼠尾基因组DNA  19-20
  1.15 脂肪组织HE染色  20
  1.16 数据处理和统计学分析  20-21
2. 结果与结论  21-53
  第一部分：体外实验，以前体脂肪细胞系 3T3-L1 为模型研究 S100A16 对成脂的影响及分子机制  21-36
    2.1 前体脂肪细胞3T3-L1分化成熟为脂肪细胞过程中，S100A16蛋白表达水平逐渐上调  21-22
    2.2 成功构建S100A16高表达细胞株及干扰细胞株细胞模型  22-23
    2.3 S100A16促进前体脂肪细胞3T3-L1细胞内脂质聚集  23-24
    2.4 S100A16促进脂肪细胞标志蛋白表达  24-29
    2.5 S100A16促进前体脂肪细胞3T3-L1增值  29-30
    2.6 高表达S100A16下调脂肪细胞对胰岛素刺激的敏感性  30-33
    2.7 S100A16蛋白通过和肿瘤抑制蛋白p53结合来调控其活性  33-35
    2.8 在3T3-L1中，胞浆中Ca2+浓度升高，S100A16出核；而胞浆中Ca2+浓度降低，S100A16入核  35-36
  第二部分：构建和鉴定 S100A16 转基因小鼠和基因敲除小鼠  36-48
    2.9 构建S100A16转基因小鼠和基因敲除小鼠  36-37
    2.10 各种小鼠基因型的鉴定  37-38
    2.11 Q-PCR和Western Blot进一步鉴定是否成功构建各种模型小鼠  38-47
    2.12 HE染色鉴定S100A16对脂肪细胞形态的影响  47-48
  第三部分：体外实验，以原代细胞MEF为模型，研究S100A16对成脂的影响及分子机制  48-53
    2.13 提取鉴定原代小鼠胚胎成纤维细胞MEF  48-49
    2.14 高表达S100A16促进MEF分化为脂肪细胞  49-50
    2.15 高表达S100A16促进MEF增值  50-52
    2.16 S100A16可能通过与S100B相结合进而与p53结合并影响其功能  52-53
3. 讨论  53-56
参考文献  56-59
文献综述  59-71
  参考文献  66-71
附录  71-73
攻读学位期间发表文章情况  73-74
致谢  74

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 病理学 > 病理生理学
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