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莲子分离蛋白对小鼠抗衰老作用的研究

作　者: 夏琨
导　师: 郑铁松
学　校: 南京师范大学
专　业: 食品科学
关键词: 莲子分离蛋白 DE-52纯化氨基酸评价衰老动物模型石蜡切片
分类号: R151
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

本文以莲子作为原料,通过优化蛋白质的提取条件,采用DEAE-cellulose52纯化得到分离蛋白,评价其营养价值,并通过D-半乳糖致衰老小鼠实验进一步研究分离蛋白的抗衰老作用,结果如下：1.采用Tris-HCl缓冲液浸提莲子中的总蛋白,并利用响应面法优化其提取条件,得到的最佳提取工艺为：液料比7.2：1,提取时间2.4h,提取温度11.1℃,此时总蛋白的提取率达到81.35%,与回归模型的相对误差小于0.5%。2.经透析除盐后的莲子蛋白再结合DEAE-cellulose52纯化,即用最佳工艺提取的蛋白液上样,用不同浓度(0.2、0.4、0.6、0.8mo1/L)的Tris-NaCl洗脱液梯度洗脱,得到的分离蛋白蛋白浓度为83.75%。氨基酸分析后得出分离蛋白中氨基酸种类是16种,必需氨基酸的比例为57%,分离蛋白的氨基酸评分为48.2,化学评分为38.4,接近于WHO/FAO的氨基酸模式,生物价约为47,营养价值较全面。3.建立D-半乳糖致衰老的动物模型,分为正常组、模型组、高剂量组、低剂量组以及阳性对照组,通过测定血液以及肝脏、心脏、肾脏中的抗氧化指标(包括丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱时肽过氧化物酶(GSH-Px)的酶活力)以及皮肤中的羟脯氨酸的含量来研究莲子分离蛋白的抗衰老活性,结果显示,高剂量的莲子分离蛋白(500mg/kg/d)能明显降低血液与内脏组织中的MDA含量,能显著提高CAT、GSH-Px、SOD的活力以及皮肤中的羟脯氨酸含量(P<0.05),而低剂量(100mg/kg/d)的作用不显著(P>0.05),但与模型组相比还是有一定的作用,阳性对照组(300mg/kg/d)的作用几乎介于两者之间,符合理论的剂量关系,且莲子分离蛋白对于抗氧化酶的作用力大小为：CAT>SOD>GSH-Px。并通过石蜡切片后的细胞观察,得出模型组中细胞核内含物明显增多、染色深,高剂量组与阳性对照组均能明显改善此现象,但低剂量组改善作用不显著,进一步证实了前面所测指标的准确性。由于关于莲子分离蛋白的抗衰老作用的体内研究很少,故本实验的研究成果为莲子的进一步开发利用与深入研究提供了科学得理论依据。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
目录  7-9
第1章绪论  9-20
  1.1 国内外莲子保健功能研究进展  9-10
    1.1.1 莲子  9
    1.1.2 莲子的营养价值  9-10
  1.2 国内外关于蛋白质提取纯化方法的研究概况  10-12
  1.3 国内外的衰老理论及对D-半乳糖衰老模型的研究进展  12-18
    1.3.1 国内外的衰老学说  12-14
    1.3.2 衰老模型的研究概况  14-16
    1.3.3 衰老的细胞学表现  16
    1.3.4 D-半乳糖衰老模型的研究进展  16-18
  1.4 本课题的研究目的与意义  18-19
  1.5 本课题研究的主要内容  19-20
第2章响应面法优化莲子总蛋白的提取工艺的研究  20-30
  2.1 材料与方法  20-22
    2.1.1 材料与试剂  20
    2.1.2 主要仪器设备  20
    2.1.3 实验方法  20-22
  2.2 结果与分析  22-25
    2.2.1 总蛋白提取率的单因素实验  22-25
  2.3 响应面分析法优化总蛋白的提取条件  25-29
    2.3.1 响应面设计结果与分析  25-26
    2.3.2 模型的建立及方差分析  26-27
    2.3.3 总蛋白提取工艺的响应面分析  27-28
    2.3.4 总蛋白最佳提取工艺的确定及模型的验证  28-29
  2.4 本章小结  29-30
第3章莲子分离蛋白的提取及其氨基酸评价  30-39
  3.1 材料与方法  30-32
    3.1.1 材料与试剂  30-31
    3.1.2 主要仪器与设备  31
    3.1.3 实验方法  31-32
  3.2 结果与分析  32-37
    3.2.1 莲子分离蛋白的提取结果  32-33
    3.2.2 莲子分离蛋白的营养成分含量测定及氨基酸分析  33-37
  3.3 本章小结  37-39
第4章莲子分离蛋白对D-半乳糖致衰老模型作用的研究  39-62
  4.1 材料与方法  39-40
    4.1.1 材料与试剂  39-40
    4.1.2 主要仪器与设备  40
  4.2 实验方法  40-44
    4.2.1 莲子分离蛋白的提取  40
    4.2.2 实验分组与处理  40
    4.2.3 样本处理及测定  40-42
    4.2.4 数据处理  42
    4.2.5 细胞观察(石蜡切片)  42-44
  4.3 结果与分析  44-60
    4.3.1 模型的建立  44-45
    4.3.2 小鼠体重的变化  45-46
    4.3.3 各器官的重量变化  46-47
    4.3.4 血液中不同实验时间10 d、20 d、40 d的MDA含量、GSH-PX以及SOD酶活力的比较  47-49
    4.3.5 莲子分离蛋白对D-半乳糖致衰老模型体内血液及组织器官中抗氧化指标的影响  49-59
    4.3.6 肝脏组织石蜡切片的观察结果  59-60
  4.4 本章小结  60-62
全文结论  62-63
参考文献  63-75
在读期间发表的学术论文及研究成果  75-76
致谢  76

莲子分离蛋白对小鼠抗衰老作用的研究

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