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硫酸安普霉素对凡纳滨对虾的安全性评价

作　者: 孙智武
导　师: 曹俊明
学　校: 华中农业大学
专　业: 水产养殖
关键词: 硫酸安普霉素 凡纳滨对虾 嗜水气单胞菌 安全性 残留 消除
分类号: S945.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


本论文探讨了硫酸安普霉素(Apramycin sulphate)对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的体外抑菌效果；研究了硫酸安普霉素对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的毒性作用和对其生长、血清生化、非特异性免疫、肠道菌群、抗嗜水气单胞菌感染能力的影响以及在组织中的残留与消除规律。主要研究成果如下：1.硫酸安普霉素对嗜水气单胞菌体外抑菌效果。测定了硫酸安普霉素对嗜水气单胞菌的最小抑菌(MIC)和杀菌(MBC)浓度、抑菌和杀菌曲线、抑菌后效应(PAE)以及耐药性获得速率。结果显示,硫酸安普霉素MIC、 MBC和MBC/MIC分别为0.5、1μg/mL和2；硫酸安普霉素在嗜水气单胞菌调整期具有明显的抑菌效果,属于静止期杀菌药物,具有较长的PAE,呈明显的浓度依赖性；经过10代继代培养,其耐药性获得速率为2倍。2.硫酸安普霉素对凡纳滨对虾的急性、亚急性毒性作用。选取体重4.0～5.0g对虾150尾,分别浸泡在硫酸安普霉素浓度为0、0.1、1.0、10、100mg/L的50L水体中,统计对虾的存活率。结果显示,96h内硫酸安普霉素最高浓度组对虾的存活率为93.3%。选用初体重(1.01±0.01)g对虾240尾,随机分为4组,分别投喂添加0、300、1500和3000mg/kg硫酸安普霉素的饲料,记为G0、G300、G1500和G3000饲养28d。结果显示,14d与28d时,对虾血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性均随硫酸安普霉素添加量的增加而升高；28d时,G3000对虾肝胰指数(HSI)、血清ALT活性显著高于GO(P<0.05)。28d时,添加组对虾肝胰腺肝小管之间出现不同程度的体液渗出,基底膜与细胞分离,肝小管出现空泡变性；肠道上皮细胞坏死,肠道绒毛脱落,乃至完全被炎症细胞取代。3.硫酸安普霉素对凡纳滨对虾生长性能、体成分、非特异性免疫、肠道细菌数量、抗病力和组织形态的影响。选取体重(0.50±0.01)g对虾960尾,随机分为6组,分别投喂添加0、60、120、180、240和300mg/kg硫酸安普霉素的饲料,记为G0、 G60、 G120、 G180、 G240和G300。49d时,采用嗜水气单胞菌进行浸泡感染。结果显示：(1)各组间对虾的存活率(SR)、摄食量(FI)和饲料系数(FC)未出现显著性差异(P>0.05)；G180～240对虾特定生长率(SGR)和蛋白质效率(PER)显著高于G0(P<0.05)。G240对虾血清总蛋白(TP)、甘油三酯(TG)、全虾粗蛋白(CP)显著高于G0(P<0.05), UA含量显著低于GO(P<0.05)。(2)与GO相比,各添加组对虾血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)活性和肝胰腺中LZM、 AKP、酸性磷酸酶(ACP)、SOD活性未产生显著性差异(P>0.05),但G240血清ACP和POD活性显著高于GO(P<0.05),G300肠道细菌总数和弧菌(vibrio)数量、G240肠道弧菌数量显著低于GO(P<0.05)。G240对虾在浸泡感染嗜水气单胞菌96h内的累计死亡率最低(43.3%),相对保护率达到50.1%。(3)G180～G300肝胰腺肝小管之间体液渗出,基底膜与细胞分离,肝小管空泡变性、坏死溶合；G180～G300肠道上皮细胞大面积坏死,肠道绒毛脱落,粘膜下层炎症细胞浸润。49d时,肝胰腺和肌肉中硫酸安普霉素含量分别为2.92～19.11μg/g和0.91～8.20μg/g,均药物添加量的增加而升高。4.硫酸安普霉素在凡纳滨对虾组织内的残留消除规律。选用体重为(0.47±0.01)g的凡纳滨对虾640尾,随机分为4组,分别投喂添加0、80、240和400mg/kg硫酸安普霉素的饲料28d,然后投喂基础饲料28d,采用安普霉素ELISA检测试剂盒检测停药后不同时间点对虾肝胰腺、肌肉硫酸安普霉素含量。结果显示,各添加组肝胰腺、肌肉中硫酸安普霉素含量随停药时间的推移逐渐降低。停药28d时,80、240和400mg/kg组肝胰腺中硫酸安普霉素含量分别为0.05、0.13、0.31μg/g,240和400mg/kg组肌肉中为0.10和0.18μg/g。

全文目录


摘要  8-10
ABSTRACT  10-13
英文缩写词表  13-14
第一章 文献综述  14-21
  1 抗生素在水产养殖中的应用  14-15
    1.1 防治细菌性疾病  14
    1.2 促生长、降低饲料系数  14-15
    1.3 节约营养物质  15
  2 抗生素在水产养殖应用的负面效应  15-16
    2.1 出现耐药性  15-16
    2.2 危害环境  16
    2.3 危害人类健康  16
  3 安普霉素概述  16-20
    3.1 安普霉素的理化性质  16-17
    3.2 安普霉素的作用机理  17
    3.3 安普霉素在动物机体内的药物代谢动力学  17-18
    3.4 安普霉素的毒理学研究  18
    3.5 安普霉素对动物生产性能的影响  18-19
    3.6 安普霉素的临床应用  19
    3.7 安普霉素的耐药性问题  19-20
  4 本文研究目的、意义及研究内容  20-21
第二章 硫酸安普霉素对嗜水气单胞菌的体外抑菌效果  21-28
  2.1 试验材料  21
    2.1.1 硫酸安普霉素  21
    2.1.2 培养基  21
    2.1.3 嗜水气单胞菌  21
  2.2 试验方法  21-23
    2.2.1 最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)测定  21-22
    2.2.2 硫酸安普霉素对嗜水气单胞菌生长曲线测定  22
    2.2.3 硫酸安普霉素对嗜水气单胞菌杀菌曲线测定  22
    2.2.4 硫酸安普霉素后效应测定  22-23
    2.2.5 耐药性获得速率测定  23
  2.3 结果  23-25
    2.3.1 MIC 和 MBC  23
    2.3.2 嗜水气单胞菌生长动力学曲线  23
    2.3.3 硫酸安普霉素的杀菌动力学曲线  23-24
    2.3.4 硫酸安普霉素抗菌后效应  24-25
    2.3.5 嗜水气单胞菌对硫酸安普霉素耐药性  25
  2.4 讨论  25-27
  2.5 结论  27-28
第三章 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾的毒性作用  28-37
  3.1 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾的急性毒性试验  28
    3.1.1 硫酸安普霉素  28
    3.1.2 试验奸及饲养管理  28
    3.1.3 硫酸安普霉素浸泡  28
  3.2 硫酸安普霉素亚急性毒性试验  28-30
    3.2.1 硫酸安普霉素  28
    3.2.2 试验饲料  28-29
    3.2.3 试验虾与饲养管理  29-30
  3.3 结果  30-33
    3.3.1 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾急性毒性作用  30-31
    3.3.2 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾亚急性毒性作用  31-33
  3.4 讨论  33-36
    3.4.1 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾急性毒性作用  33-34
    3.4.2 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾的亚急性毒性作用  34-36
  3.5 结论  36-37
第四章 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾生长性能、体成分、非特异性免疫、肠道菌群和抗嗜水气单胞菌感染能力的影响  37-55
  4.1 材料与方法  37-40
    4.1.1 硫酸安普霉素  37
    4.1.2 试验饲料  37-38
    4.1.3 试验虾与饲养管理  38
    4.1.4 测定指标及方法  38-40
  4.2 结果与分析  40-48
    4.2.1 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾生长性能的影响  40-41
    4.2.2 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾全虾体组成的影响  41
    4.2.3 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾血清生化指标的影响  41-42
    4.2.4 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾非特异性免疫指标的影响  42-43
    4.2.5 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾肠道细菌数量的影响  43-44
    4.2.6 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾抗嗜水气单胞菌感染能力的影响  44-45
    4.2.7 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾肝胰腺、肠道组织结构的影响  45-47
    4.2.8 硫酸安普霉素在凡纳滨对虾组织内的残留  47-48
  4.3 讨论  48-54
    4.3.1 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾生长性能、体成分和血清生化指标的影响  48-50
    4.3.2 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾非特异性免疫指标的影响  50
    4.3.3 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾肠道菌群数量的影响  50-51
    4.3.4 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾抗嗜水气单胞菌感染能力的影响  51-52
    4.3.5 硫酸安普霉素对凡纳滨对虾肝胰腺、肠道结构的影响  52-53
    4.3.6 凡纳滨对虾组织内硫酸安普霉素的残留  53-54
  4.4 结论  54-55
第五章 硫酸安普霉素在凡纳滨对虾组织中的残留消除  55-61
  5.1 材料  55-56
    5.1.1 试验药品  55
    5.1.2 试验饲料  55
    5.1.3 试验虾与饲养管理  55-56
    5.1.4 样品采集  56
  5.2 检测方法  56-57
    5.2.1 测定原理  56
    5.2.2 试液的配置  56
    5.2.3 样品前处理  56-57
    5.2.4 标准曲线的制备与样品的检测  57
  5.3 结果与分析  57-58
  5.4 讨论  58-60
  5.5 结论  60-61
全文总结  61-63
参考文献  63-79
致谢  79-80
附录：在读期间发表论文情况  80-81

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中图分类: > 农业科学 > 水产、渔业 > 水产保护学 > 甲壳类病虫害及其防治 > 虾类
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