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酵母多糖提取工艺优化及免疫学活性研究

作　者: 王慧
导　师: 张霞; 程富胜
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 酵母多糖提取工艺免疫调节组成分析黏膜免疫
分类号: S859.79
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

酵母是一类与人类生产生活密切相关的真核微生物，在其细胞膜的外面包裹着一层厚度为100-400nm的细胞壁，酵母细胞壁干重的近75%为多糖。酵母多糖是一种复杂的多糖复合物，表现出很强的生物活性，能调节机体体液免疫和细胞免疫能力，能结合吸附外源性病原菌，调节肠道菌群平衡，并具有抗氧化、抗辐射、抗肿瘤等活性功能。在单因素试验的基础上，利用中心组合（Box-Behnken）试验设计原理，以高压时间、超声功率和超声时间为试验因素，以多糖提取率为响应值，采用三因素三水平的响应面分析法对酵母多糖的提取条件进行了优化。经二次多项式逐步回归分析获得最佳提取工艺：高压时间35min，超声功率510W，超声时间26min；在此条件下，多糖提取率的预测值为29.82%，验证值为29.84%。将酵母多糖完全水解后，用薄层色谱和双波长薄层扫描法分别对其组成和含量进行测定分析，结果表明所提酵母多糖的主要成分为葡聚糖，含量为29.69%。以大鼠为实验动物，研究酵母多糖（YPS）对环磷酰胺（CTX）所致免疫抑制大鼠的生理功能的调节和保护作用，初步探讨其作用机制。选择80只体重为（220±10g）的SD大鼠随机分为正常对照组、CTX模型组、CTX-YPS（50mg/kg）组、CTX-YPS（100mg/kg）组、CTX-YPS（200mg/kg）组，每组16只，雌雄各半。CTX-YPS组按剂量灌胃并称重，正常对照组与CTX模型组灌胃给予等量生理盐水，连续给药7d；在第5、6d，除正常对照组注射生理盐水外，其余4组腹腔注射CTX100mg/kg。第8d采血，取脾脏、胸腺、十二指肠、空肠、结肠。分别计算大鼠生长性能、免疫器官指数；测定血清中IgG、IgA、表皮生长因子（EGF）、碱性磷酸酶（AKP）、溶菌酶（LZM），空肠分泌物中SIgA及结肠壁中前列腺素E2（PGE2）的含量，观察肠道黏膜病理组织学变化。结果显示，YPS（100mg/kg）组平均日增重比正常对照组显著增加（P<0.05），饲料报酬亦显著增高（P<0.05）；注射CTX后各组免疫器官指数明显降低，与正常对照组差异极显著（P<0.01），胸腺指数CTX-YPS（100mg/kg）组比CTX模型组提高33.33%（P<0.05），但脾脏指数各试验组之间无显著差异（P>0.05）；CTX-YPS（100mg/kg）组血清中IgA、IgG、AKP含量显著或极显著高于CTX模型组（P<0.05or P<0.01），LZM含量CTX-YPS（100mg/kg）组较CTX模型组升高但差异不显著（P>0.05）；空肠SIgA、血清EGF水平CTX-YPS（100mg/kg）组与对照组相比分别极显著（P<0.01）和显著（P<0.05）提高，结肠壁中PGE2含量与CTX模型组相比CTX-YPS （100mg/kg）组显著降低（P<0.05）；肠黏膜上皮CTX模型组损伤严重，CTX-YPS （50mg/kg）组、CTX-YPS（200mg/kg）组均有不同程度损伤，CTX-YPS（100mg/kg）组基本正常。表明YPS能提高大鼠的生长性能；YPS对CTX所致免疫损伤具有一定的调节和保护作用，其中100mg/kg剂量的YPS效果最为显著。

全文目录

摘要  2-4
Summary  4-6
缩略词对照表  6-8
目录  8-11
第一部分文献综述  11-26
  第一章多糖的研究进展  11-20
    1 多糖的结构及构象的分析方法  11-12
    2 多糖的生物学活性  12-20
      2.1 免疫调节作用  12-15
      2.2 抗肿瘤作用  15-16
      2.3 抗氧化作用  16-18
      2.4 抗炎作用  18
      2.5 多糖的其他作用  18-20
  第二章酵母多糖研究概况  20-26
    1 酵母细胞壁的组成及结构  20-21
    2 酵母菌的抗感染作用  21-23
    3 酵母多糖的生物学活性  23-26
第二部分试验研究  26-58
  第三章响应面法优化酵母多糖的提取  26-37
    引言  26
    1 材料与方法  26-27
      1.1 材料与试剂  26-27
      1.2 仪器与设备  27
      1.3 方法  27
        1.3.1 酵母多糖提取工艺  27
        1.3.2 扫描电子显微镜（SEM）观察酵母细胞破壁效果  27
        1.3.3 单因素试验  27
        1.3.4 响应面法优化提取工艺  27
    2 结果与分析  27-35
      2.1 酵母细胞破壁效果观察  27-28
      2.2 单因素试验  28-30
        2.2.1 高压时间  28-29
        2.2.2 超声波功率  29
        2.2.3 超声处理时间  29-30
      2.3 响应面优化提取工艺条件  30-35
        2.3.1 响应面分析因素水平的选择  30-31
        2.3.2 响应面试验设计与结果  31-33
        2.3.3 响应面分析  33-35
        2.3.4 最佳提取条件的确定和验证实验  35
    3 讨论  35-36
    4 小结  36-37
  第四章酵母多糖的含量测定及单糖组成分析  37-40
    1 材料与方法  37-38
      1.1 材料与试剂  37
      1.2 仪器与设备  37
      1.3 方法  37-38
        1.3.1 酵母多糖组成分析  37
        1.3.2 酵母多糖的纯度鉴定  37-38
    2 结果与分析  38-39
      2.1 多糖的组成分析  38
      2.2 多糖的含量测定  38-39
        2.2.1 样品的测定  38-39
        2.2.2 稳定性试验  39
        2.2.3 精密度的测量  39
    3 讨论  39
    4 小结  39-40
  第五章酵母多糖对环磷酰胺所致免疫损伤大鼠的保护作用  40-58
    引言  40
    1 材料与方法  40-47
      1.1 材料与试剂  40-41
      1.2 主要仪器  41
      1.3 实验分组及方法  41
      1.4 样品的采集与处理  41
      1.5 检测项目及方法  41-47
        1.5.1 生长性能  41-42
        1.5.2 免疫器官指数  42
        1.5.3 免疫指标  42-46
        1.5.4 组织病变观察  46-47
      1.6 统计方法  47
    2 结果  47-54
      2.1 YPS对大鼠生长性能的影响  47-49
      2.2 YPS对CTX致免疫低下大鼠免疫器官指数的影响  49
      2.3 YPS对CTX致免疫低下大鼠血清中部分免疫指标的影响  49-51
      2.4 YPS对CTX致免疫低下大鼠肠道黏膜免疫的影响  51-54
        2.4.1 肠黏膜上皮形态  51-53
        2.4.2 肠黏膜免疫部分相关指标  53-54
    3 讨论  54-56
    4 小结  56-58
参考文献  58-75
致谢  75-76
作者简介  76-78
导师简介  78-79

酵母多糖提取工艺优化及免疫学活性研究

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