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板栗不同品种(系)多糖结构和活性的初步研究
作 者: 梁雪
导 师: 王同坤; 杨越冬
学 校: 河北科技师范学院
专 业: 果树学
关键词: 板栗品种(系) 多糖 提取工艺 结构分析 单糖组成 抗肿瘤
分类号: S664.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要
自从20世纪40年代发现真菌多糖具有抗癌活性以来,国内外关于天然多糖生物活性的研究越来越受到重视。本文以燕山板栗为试验材料,优化了板栗多糖最佳提取纯化工艺,比较了板栗不同品种(系)多糖红外光谱、单糖组成和含量,初步研究了板栗多糖的结构和抗肿瘤活性,对于科学评价板栗多糖的利用价值,更好地开发利用板栗种质资源具有重要意义。主要研究内容和结果如下:1.筛选了板栗多糖的最佳提取工艺。研究了加压溶剂萃取技术的最佳提取工艺,并与热水辅助提取、微波辅助提取、盐酸辅助提取、超声波辅助提取法进行了比较,结果表明加压溶剂萃取法是一种快速、溶剂用量少、萃取效率较高的多糖提取方法。2.研究了多糖的纯化工艺和分子量。采用Sevage法去除蛋白质后,再利用大孔树脂AB-8去蛋白和脱色,可使蛋白质的去除率达到80%,脱色率可达到86.36%,明显优于活性炭法和双氧水法的脱色率。经DEAE-52纤维素柱层析和Sephadex G-100凝胶柱层析进一步分离纯化后紫外分光光度法检测,只有一个主峰,表明获得的板栗多糖较纯且为均一组分;经测定,板栗多糖重均分子量为在15.66min,3.28×105Da。3.初步研究了20个不同品种(系)板栗的多糖结构。IR分析表明:样品中均有多糖的一般特征吸收峰。其中‘燕山短枝’、‘大板红’、‘遵玉’、‘燕龙’、‘燕王’、‘道马寨’、‘王厂沟’、‘迁西早红’、‘迁西晚红’、‘安优’、‘迁西1号’、‘迁西5号’、‘青龙30号’均有特征吸收峰,一般认为含有特征吸收峰的多糖具有较强的活性。4.研究了单糖的组成。GC-MS分析结果显示6个板栗品种‘燕山短枝’、‘大板红’、‘燕龙’、‘燕王’、‘迁西早红’、‘迁西晚红’的单糖均由鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成,但不同品种单糖含量不同,其中‘燕山短枝’中葡萄糖含量最高,为多糖含量的76.64%,‘燕王’中半乳糖含量最高,为多糖含量的44.61%。5.以‘燕龙’多糖为试材,初步研究了板栗多糖的抗肿瘤活性。研究表明,板栗多糖能够抑制人肝癌细胞Bel-7402、肺癌细胞A-549、子宫癌细胞HCT-8。抑制率随着多糖浓度的增大而增大,当多糖浓度为300μg/mL时,对人肝癌细胞Bel-7402、肺癌细胞A-549、子宫癌细胞HCT-8的抑制率为分别为69.54%、51.38%和55.27%,表明含有-糖苷键的‘燕龙’具有较强的抗肿瘤活性。
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全文目录
缩略词 4-5 摘要 5-6 ABSTRACT 6-10 第一章 绪论 10-20 1.1 板栗概述 10-12 1.1.1 板栗资源的世界分布情况 10 1.1.2 我国板栗资源的分布情况 10-11 1.1.3 燕山板栗资源的分布情况 11 1.1.4 板栗的食用价值 11 1.1.5 板栗的药用价值 11-12 1.2 多糖的研究 12-17 1.2.1 糖生物学的兴起 12 1.2.2 多糖的提取、纯化、鉴定 12-15 1.2.3 多糖生物学活性 15-17 1.3 板栗多糖研究进展 17-18 1.4 研究目的、意义和内容 18-20 1.4.1 研究目的和意义 18-19 1.4.2 研究内容 19-20 第二章 板栗多糖的提取和含量测定 20-30 2.1 材料与方法 20-23 2.1.1 试验材料 20 2.1.2 试验方法 20-23 2.2 结果与分析 23-28 2.2.1 葡萄糖标准曲线的建立 23 2.2.2 单因素试验结果 23-25 2.2.3 加压溶剂萃取板栗多糖工艺优化 25-27 2.2.4 验证性试验 27 2.2.5 板栗多糖 5 种提取方法的比较 27-28 2.3 讨论 28-30 第三章 板栗多糖的分离纯化 30-38 3.1 材料与方法 30-34 3.1.1 试验材料 30-31 3.1.2 试验方法 31-34 3.2 结果与分析 34-37 3.2.1 Sevage 法去除蛋白质 34-35 3.2.2 脱除色素 35 3.2.3 多糖液的纯化 35-36 3.2.4 板栗多糖的分子量 36-37 3.3 讨论 37-38 第四章 不同品种(系)板栗多糖结构的初步表征 38-60 4.1 材料与方法 38-40 4.1.1 试验材料 38-39 4.1.2 试验方法 39-40 4.2 结果与分析 40-58 4.2.1 不同品种(系)板栗多糖红外光谱分析 40-46 4.2.2 还原糖标准曲线 46-47 4.2.3 单因素试验结果 47-48 4.2.4 板栗多糖水解工艺的优化 48-54 4.2.5 单糖标准品的 GC-MS 分析 54 4.2.6 不同品种(系)板栗多糖样品的单糖组成 54-58 4.3 讨论 58-60 第五章 板栗多糖抗肿瘤作用初步研究 60-63 5.1 材料与方法 60-61 5.1.1 试验材料 60 5.1.2 试验方法 60-61 5.2 结果与分析 61-62 5.2.1 板栗多糖对人肝癌细胞 Bel-7402、肺癌细胞 A-549、子宫癌细胞HCT-8 的活性影响 61-62 5.3 讨论 62-63 第六章 结论及创新点 63-66 6.1 结论 63-65 6.2 创新点 65-66 参考文献 66-71 发表论文和参加科研情况说明 71-72 致谢 72
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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 果树园艺 > 坚果类(壳果类) > 栗
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