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西洋参花药愈伤组织无性系建立及高产无性系的筛选

作　者: 张成国
导　师: 姚春林; 王英平
学　校: 中国农业科学院
专　业: 药用植物资源学
关键词: 西洋参花药培养愈伤组织皂苷
分类号: S567.53
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

西洋参（Panax quinquefolium L.），又名广东人参，花旗参，属于五加科（Araliaceae）人参属（Panax）的多年生宿根性草本植物，与中国人参（Panax ginseng L.），三七（Panax notoginsengL.）同属不同种，是一种名贵中草药。本文以西洋参花药为外植体，通过诱导培养基和继代培养基筛选试验，建立西洋参花药愈伤组织无性系；通过分化培养基筛选试验，对愈伤组织再分化进行研究；通过愈伤组织资源生长情况和皂苷含量的比较试验，筛选生长稳定的高产无性系。主要研究结果如下：1.考察不同培养基组成，不同浓度2,4-D、6-BA和蔗糖对西洋参花药愈伤组织诱导的影响。结果表明，单独添加一定浓度的2,4-D能够诱导愈伤组织的形成。2,4-D2mg/L和6-BA0.5mg/L的激素配比下，西洋参花药愈伤组织的诱导率为十个培养基中最高，达到37.53%。蔗糖浓度为60g/L时，诱导率达到最高，随着蔗糖浓度进一步提高，反而不利于花药愈伤组织的诱导。MS培养基较PⅡ培养基更适合作为西洋参花药愈伤组织培养的基本培养基。筛选出诱导西洋参花药愈伤组织的最佳培养基MS+2,4-D2.0mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖60g/L+琼脂5.5g/L+水解乳蛋白0.5g/L。2.考察不同浓度2,4-D、6-BA对西洋参花药愈伤组织继代的影响。结果表明，2,4-D2mg/L，6-BA浓度在0.5~2mg/L的激素配比，均能让花药愈伤组织保持良好生长。初步建立了西洋参愈伤组织无性系，保存西洋参愈伤组织资源115份。3.考察不同激素配比对西洋参花药愈伤组织分化影响，设计11个分化培养基配方。结果表明，愈伤组织在F6、F9分化培养基中分化出共8个绿原基。西洋参花药培养分化培养试验条件有待深入研究。4.考察20份西洋参愈伤组织资源的生长情况，以愈伤组织继代一次的鲜重增长率为指标。结果表明，在连续四次继代中，20份愈伤组织资源生长相对稳定。其中，6份增长率超过200%，5份增长率介于150~200%，7份增长率100~150%，2份增长率低于100%。5.采用超高液相色谱法，测定20份愈伤组织资源的皂苷含量。结果表明，愈伤组织资源中总皂苷含量超过1%的有8#、9#、14#、25#、47#，共计5份。愈伤组织资源中总皂苷含量介于0.5~1%的有4#、5#、48#、69#，共计4份。其余11份愈伤组织资源皂苷含量低于0.5%。总皂苷含量最高的为25#，总皂苷含量超过3%。该含量接近西洋参中根的总皂苷含量。单体人参皂苷Rg1、Re和Rb1在20份愈伤组织资源中含量最为丰富。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-13
英文缩略表  13-14
第一章引言  14-20
  1.1 西洋参概况  14-15
    1.1.1 生物学特性  14
    1.1.2 药用价值  14
    1.1.3 分布及种质资源状况  14-15
  1.2 西洋参组织培养研究进展  15-16
    1.2.1 外植体  15
    1.2.2 培养基  15
    1.2.3 植物激素  15-16
    1.2.4 环境条件  16
    1.2.5 人参皂苷的含量  16
  1.3 西洋参细胞悬浮培养研究进展  16-18
    1.3.1 西洋参悬浮培养细胞无性系的诱导与高产株系的筛选  17-18
    1.3.2 西洋参细胞悬浮培养生长周期  18
    1.3.3 西洋参细胞悬浮培养的研究展望  18
  1.4 花药培养研究概况  18-19
  1.5 研究的目的、意义和主要内容  19-20
    1.5.1 研究目的  19
    1.5.2 研究意义  19
    1.5.3 研究主要内容  19-20
第二章西洋参花药愈伤组织的诱导  20-27
  2.1 试验材料  20
  2.2 仪器和试剂  20
  2.3 试验方法  20-22
    2.3.1 花药接种方法  20
    2.3.2 不同浓度生长素 2,4-D 对西洋参花药愈伤组织诱导的影响  20-21
    2.3.3 不同浓度细胞分裂素 6-BA 对西洋参花药愈伤组织诱导的影响  21
    2.3.4 不同浓度蔗糖对西洋参花药愈伤组织诱导的影响  21
    2.3.5 比较 MS 和改良 PⅡ培养基对西洋参愈伤组织花药诱导的影响  21-22
    2.3.6 结果观察  22
    2.3.7 数据分析  22
  2.4 结果与分析  22-25
    2.4.1 不同浓度 2,4-D 对西洋参花药愈伤组织诱导影响  22-24
    2.4.2 不同浓度 6-BA 对西洋参花药愈伤组织诱导影响  24
    2.4.3 不同浓度蔗糖对花药愈伤组织诱导的影响  24
    2.4.4 比较 MS 和改良 PⅡ培养基对西洋参花药愈伤组织诱导的影响  24-25
  2.5 小结与讨论  25-27
第三章西洋参花药愈伤组织的继代培养  27-33
  3.1 试验材料  27
  3.2 仪器和试剂  27
  3.3 试验方法  27
  3.4 结果与分析  27-32
  3.5 小结与讨论  32-33
第四章西洋参花药愈伤组织分化的初步研究  33-36
  4.1 试验材料  33
  4.2 仪器和试剂  33
  4.3 试验方法  33-34
  4.4 结果与分析  34-35
  4.5 小结与讨论  35-36
第五章西洋参愈伤组织资源皂苷含量的比较  36-45
  5.1 试验材料  36
  5.2 仪器和试剂  36
  5.3 试验方法  36-37
    5.3.1 愈伤组织资源生长量的测定  36
    5.3.2 样品制备和标准曲线的绘制  36-37
    5.3.3 愈伤组织资源皂苷含量的测定  37
  5.4 结果与分析  37-43
    5.4.1 愈伤组织资源生长量测定  37-38
    5.4.2 标准曲线的绘制  38-39
    5.4.3 愈伤组织资源皂苷含量的研究  39-43
  5.5 小结与讨论  43-45
第六章全文结论  45-46
参考文献  46-52
致谢  52-53
作者简历  53

西洋参花药愈伤组织无性系建立及高产无性系的筛选

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