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丹参雄性不育基因的AFLP标记

作　者: 王真
导　师: 慕小倩; 郭宏波
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 药用植物学
关键词: 丹参雄性不育 AFLP
分类号: S567.53
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 61次
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内容摘要

丹参（Salvia miltiorrhiza Bge.）为我国常见的传统中药材之一，在临床上被广泛应用于心血管疾病的预防与治疗上。近年来随着对野生资源的过度开采以及生产管理方式的落后，导致现有种质资源严重退化，药材质量下降，在一定程度上影响了其疗效。雄性不育是植物界存在的一种普遍现象，大量研究表明，利用雄性不育系培育品种在很多方面都有独特的优势。2002年舒志明等在田间发现了丹参雄性不育株，并命名为Sh-B，这为实现丹参品质的遗传改良及其杂种优势利用开辟了新的道路。本研究在此基础上利用AFLP标记技术，筛选出与丹参育性基因紧密连锁的分子标记，以期为丹参雄性不育材料的转育和利用提供依据。试验中得到的主要结果和结论如下：1田间群体育性调查结果发现，在随机调查的73株单株中，不育株为37株，可育株为36株，卡方检验符合1：1的理论分离比；2通过优化试验条件，获得了一种以CTAB法为基础的快速、简便分离完整基因组DNA的方法，该技术可有效地从富含多酚和多糖的药用植物中分离出高质量的DNA并直接用于AFLP分析；3本研究采用扩增片段长度多态性（AFLP）的分子标记方法结合群分法（BSA）构建的不育/可育基因池，通过筛选128对引物组合，发现共有5对引物在两个基因池间表现出稳定的多态性；4将上述筛选出的引物组合用73株单株进行群体验证，研究发现仅有1对引物与丹参育性基因之间存在连锁关系，记为E11/M4；该标记在群体中的重组率为6.85%，由Kosambi函数计算得出它们之间的遗传距离为6.89cM；5试验将通过群体验证得到的标记片段回收、克隆到pGM-T载体进行测序。测序结果表明，该片段全长208bp，其碱基组成为A+T=51.92%；将该序列提交到NCBI网站运行Blastn程序与拟南芥基因组进行比对，结果发现其与拟南芥具有较高的同源性。

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-10
第一章文献综述  10-22
  1.1 植物雄性不育的类型及特点  10-13
    1.1.1 细胞核雄性不育（GMS）  11
    1.1.2 细胞质雄性不育（CMS）  11-13
  1.2 植物雄性不育研究进展  13-17
    1.2.1 植物雄性不育的形态学和细胞学研究进展  13-15
    1.2.2 植物雄性不育的生理生化研究进展  15-16
    1.2.3 植物雄性不育的分子机制研究进展  16-17
  1.3 AFLP 分析的原理及应用  17-19
    1.3.1 AFLP 标记的原理  18
    1.3.2 AFLP 标记的应用  18-19
  1.4 本研究的目的及意义  19-22
第二章材料和方法  22-32
  2.1 试验材料  22
    2.1.1 植物材料  22
    2.1.2 酶及试剂  22
    2.1.3 仪器设备  22
    2.1.4 菌株及载体  22
  2.2 试验方法  22-32
    2.2.1 田间群体的构建和培养  22
    2.2.2 田间育性调查  22-23
    2.2.3 AFLP 引物的筛选  23-28
      2.2.3.1 丹参叶片基因组 DNA 的提取与纯化  23
      2.2.3.2 不育池和可育池的构建  23-25
      2.2.3.4 预扩增体系及步骤  25
      2.2.3.5 选择性扩增体系及步骤  25-26
      2.2.3.6 变性聚丙烯酰胺电泳  26-28
    2.2.4 群体验证  28
    2.2.5 多态性 DNA 片段的回收与重扩增  28-29
    2.2.6 目的片段的克隆  29-32
第三章结果与分析  32-40
  3.1 田间试验结果分析  32
  3.2 室内试验结果分析  32-40
    3.2.1 丹参基因组 DNA 质量检测结果与分析  32-33
    3.2.2 基因组 DNA 酶切、连接结果检测  33-34
    3.2.3 预扩增结果检测  34-35
    3.2.4 选择性扩增及多态性引物筛选结果分析  35-36
    3.2.5 群体验证结果分析及遗传距离计算  36-37
    3.2.6 变性聚丙烯酰胺凝胶上差异片段的回收与二次扩增  37-38
    3.2.7 差异片段的克隆、测序  38
    3.2.8 序列比对分析  38-40
第四章讨论  40-45
  4.1 基因组 DNA 的提取  40
  4.2 AFLP 标记内切酶和引物的选择  40-41
  4.3 AFLP 扩增中应注意的问题  41-42
  4.4 银染及聚丙烯酰胺凝胶上差异片段的回收问题  42-43
  4.5 AFLP 分子标记技术的应用价值  43-45
第五章结论  45-46
参考文献  46-52
附录  52-53
缩略词表  53-54
致谢  54-55
作者简介  55

丹参雄性不育基因的AFLP标记

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