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银杏内生真菌的分离及抑菌活性研究

作　者: 柏钰
导　师: 花日茂
学　校: 安徽农业大学
专　业: 农药学
关键词: 银杏 内生真菌 抑菌活性 代谢产物
分类号: S482.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


植物内生真菌能够产生结构新颖、功能特殊的天然活性物质，是开发新型生物源农药的宝贵资源，在农业中具有广泛的应用前景。本文从银杏树中分离筛选得到2株内生真菌，编号为T-4和T-7，对几种重要的植物病原菌具有抑制作用，对其进行了生物学特性测定和代谢产物抑菌活性研究。主要研究结果如下：1.采用组织分离法，从银杏的茎、叶片和根皮组织内分离得到26株内生真菌。通过对峙试验，测定了26株内生真菌对辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici），番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)，苹果腐烂病菌(Cytospora mandshurica)，苹果炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides），梨黑星病菌(Venturia pirina)，小麦赤霉病菌（Fusarium graminearum）6种植物病原菌的拮抗作用。结果表明17株内生真菌对6种供试病原菌有不同程度的抑制作用。其中T-4和T-7菌株作用较明显，对6种病原菌抑菌率均达到50%以上，对苹果腐烂病菌均达到90%以上；T-7对辣椒疫霉病菌的抑制率也达到90%以上。T-4对番茄枯萎病菌抑制率则在85%。2.内生真菌T-4和T-7的分类鉴定结果显示二者同为镰孢属（Fusarium sp.）,其中T-7经分子生物学鉴定为为腐皮镰孢菌(Fusarium solani)。生物学特性研究测定了不同温度、光照、酸碱度及碳源、氮源和培养基条件下两株菌的生长情况。试验结果表明两株菌生长的适宜温度范围在28℃-32℃；T-4和T-7菌株分别适合在pH值为7-9和6-10范围内生长；葡萄糖和麦芽糖是T-4菌株生长的最适碳源，乳糖是T-7的最适碳源；T-4菌株生长适用的氮源是胰蛋白胨，T-7为硝酸钠； PDA或PSA是T-4菌株生长的适宜培养基，牛肉膏培养基对于T-7更为适用；两者皆不受光照条件影响。3.采用抑制菌丝生长速率法测定了26株内生真菌代谢产物的抑菌作用。经摇瓶发酵得到的菌丝，用乙酸乙酯萃取，得到的粗提物在200mg/L浓度下对供试病原菌的抑制作用较弱。发酵液对6种供试病原菌抑菌活性测定发现，T-4和T-7菌株发酵液表现出对苹果腐烂病菌、苹果炭疽病菌、梨黑星病菌和小麦赤霉病菌和番茄枯萎病菌的抑制作用，对苹果腐烂病菌的抑制率分别达到90%和85%以上。二者对辣椒疫霉病菌都没有表现出抑制作用。检测T-4、T-7菌丝发酵液在辣椒幼苗上的抑菌作用，结果表明T-7发酵液对感染辣椒疫霉的幼苗有23.17%的保护作用和15.43%的治疗作用，表现出一定的防治效果。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-8
第一章 文献综述  8-14
  1.1 微生物农药  8
  1.2 植物内生菌  8-10
    1.2.1 植物内生菌的定义  8-9
    1.2.2 植物内生真菌的生物多样性和普遍性  9-10
    1.2.3 植物内生真菌与宿主的关系  10
  1.3 植物内生真菌的开发与应用  10-13
    1.3.1 内生真菌在医药方面的应用  11-12
    1.3.2 生物防治  12-13
  1.4 论文研究的目的及意义  13-14
第二章 内生真菌的分离筛选  14-18
  2.1 材料  14
    2.1.1 菌种分离材料  14
    2.1.2 供试病原菌  14
    2.1.3 培养基  14
    2.1.4 主要试剂  14
    2.1.5 主要仪器设备  14
  2.2 方法  14-15
    2.2.1 样品采集  14
    2.2.2 内生真菌分离方法  14-15
    2.2.3 消毒效果的验证  15
    2.2.4 菌株筛选  15
  2.3 结果与分析  15-17
    2.3.1 内生真菌分离与纯化  15
    2.3.2 活性菌株的筛选  15-17
  2.4 小结与讨论  17-18
    2.4.1 银杏内生真菌的分离  17
    2.4.2 活性菌株的筛选  17-18
第三章 T-4 和 T-7 菌株鉴定及生物学特性研究  18-28
  3.1 材料  18
    3.1.1 供试内生真菌  18
    3.1.2 生物学特性研究培养基  18
    3.1.3 主要仪器设备  18
    3.1.4 主要试剂  18
  3.2 方法  18-19
    3.2.1 内生真菌 T-4 和 T-7 分类鉴定  18-19
    3.2.2 生物学特性研究  19
      3.2.2.1 温度条件对菌落生长的影响  19
      3.2.2.2 光照对菌落生长的影响  19
      3.2.2.3 pH 值对菌落生长的影响  19
      3.2.2.4 碳源对菌落生长的影响  19
      3.2.2.5 氮源对菌落生长的影响  19
      3.2.2.6 培养基对菌落生长的影响  19
  3.3 结果与分析  19-26
    3.3.1 T-4 和 T-7 菌株的分类鉴定  19-21
    3.3.2 T-4 和 T-7 菌株生物学特性研究  21-26
      3.3.2.1 温度对 T-4 和 T-7 菌株生长的影响  21
      3.3.2.2 pH 值对菌株生长的影响  21-22
      3.3.2.3 光照对菌株生长的影响  22-23
      3.3.2.4 碳源对菌株生长的影响  23-24
      3.3.2.5 氮源对菌株生长的影响  24-25
      3.3.2.6 培养基对菌株生长的影响  25-26
  3.4 小结与讨论  26-28
    3.4.1 T-4 和 T-7 菌株分类鉴定  26
    3.4.2 生物学特性研究  26-28
第四章 内生真菌代谢产物抑菌活性的研究  28-34
  4.1 材料  28-29
    4.1.1 菌种  28
      4.1.1.1 供试病原菌  28
      4.1.1.2 供试内生真菌  28
    4.1.2 液体发酵培养基  28
    4.1.3 主要仪器设备  28
    4.1.4 主要试剂  28-29
  4.2 方法  29-30
    4.2.1 菌株发酵  29
    4.2.2 菌丝提取物抑菌活性研究  29
    4.2.3 菌株发酵液对供试病原菌抑制率测定  29
    4.2.4 盆栽药效试验  29-30
  4.3 结果与分析  30-33
    4.3.1 菌丝体乙酸乙酯提取物抑菌活性  30-31
    4.3.2 菌株发酵液抑菌活性研究  31-32
    4.3.3 盆栽药效试验  32-33
  4.4 小结与讨论  33-34
第五章 结论  34-35
  5.1 银杏内生真菌的分离筛选  34
  5.2 T-4 和 T-7 菌株的分类鉴定和生物学特性研究  34
  5.3 菌株代谢产物抑菌活性的研究  34-35
参考文献  35-40
附图  40-42
致谢  42-43
作者简介  43
在读期间发表的论文  43

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 农药防治（化学防治） > 各种农药 > 杀菌剂
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