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胡麻（Linum usitatissimum L.）枯萎病病原真菌鉴定及ISSR分子标记分析

作　者: 刘姗姗
导　师: 王志钢; 苑琳; 曹贵方
学　校: 内蒙古大学
专　业: 生物工程
关键词: 胡麻枯萎病尖孢镰刀菌 ISSR 遗传多样性聚类分析
分类号: S435.659
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

胡麻(Linum usitatissimum L.),隶属亚麻科(Linaceae)、亚麻属(Linum),是我国主要的经济作物之一。胡麻枯萎病常年发病率为10%-30%,严重时可达50%以上,严重影响胡麻产量和纤维质量。胡麻枯萎病是由尖孢镰刀菌胡麻专化型(Fusarium oxysporum f. sp.lini)侵染引起,生长各期均可发病。与瓜类、茄科类农作物枯萎病研究进展相比,胡麻枯萎病病原菌分离和鉴定技术、遗传多样性分析及抗病育种研究等方面才刚刚起步。本文在2010-2011年间在我国6个省及自治区采集胡麻枯萎病病株257份,分离纯化得到真菌696株,结合生物学特性和ITS序列测定对部分菌株进行鉴定,最终确定96株菌株为尖孢镰刀菌,并作为供试菌株,以ISSR分子标记进行群体遗传多样性和遗传变异分析。得到以下结果：1、采用五因素四水平的正交试验,建立了适合于尖孢镰刀菌的ISSR-PCR反应体系:25μL PCR反应体系中含有2.5μL10×buffer、20ng DNA、1U Taq DNA聚合酶、0.6μmol·L-1引物、0.15mmol·L-1dNTPs和3.0mmol·L-1Mg2+。筛选出12条ISSR引物,并优化各引物的退火温度,建立了稳定的扩增条件。2、对96株供试菌株进行ISSR-PCR扩增,共扩增得到722条条带,其中多态性条带718条,多态性达到99.45%。平均每个引物扩增60.17个条带,所有扩增产物大小在200-5000bp之间。6个种群遗传相似性变化范围在0.9579-0.9803,平均遗传相似性为0.9688。3、尖孢镰刀菌个体间的多样性程度决定了种群间的多样性程度；种群间遗传变异占种群遗传变异的81.02%,尖孢镰刀菌种群遗传变异大部分来源于种群间的遗传变异；尖孢镰刀菌种群间存在一定的基因流动。4、在相似系数0.870处把96株尖孢镰刀菌分为5个类群,尖孢镰刀菌ISSR类群与地理来源之间存在一定相关性。供试的96株尖孢镰刀菌,遗传相似性较高,尖孢镰刀菌种内遗传分化较大,存在着丰富的遗传变异。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
目录  8-10
第一章前言  10-23
  1 亚麻  10-11
  2 亚麻枯萎病及其危害  11
  3 尖孢镰刀菌  11-12
  4 常用的DNA分子标记技术  12-20
    4.1 形态标记  12-13
    4.2 细胞标记  13-14
    4.3 生化标记  14
    4.4 分子标记  14-20
  5 分子标记在尖孢镰刀菌中的研究进展  20-21
  6 本文研究目的与意义  21-23
第二章胡麻枯萎病菌的分离纯化及ITS序列分析  23-32
  1 材料与方法  24-27
    1.1 菌株来源  24
    1.2 试剂及仪器  24-26
    1.3 方法  26-27
  2 结果与分析  27-31
    2.1 病原菌的形态学鉴定  27-28
    2.2 基因组DNA提取结果  28-29
    2.3 ITS rDNA序列分析及系统发育树的构建  29-31
  3 讨论  31-32
第三章尖孢镰刀菌ISSR-PCR分子标记体系的建立  32-44
  1 材料与方法  32-34
    1.1 供试菌株  32
    1.2 试剂及仪器  32-33
    1.3 方法  33-34
  2 结果与分析  34-42
    2.1 正交试验结果分析  34-38
    2.2 ISSR-PCR扩增引物的筛选  38-39
    2.3 ISSR-PCR扩增退火温度的确定  39-41
    2.4 ISSR-PCR体系稳定性的检测结果  41-42
  3 讨论  42-44
第四章尖孢镰刀菌ISSR分子标记分析  44-56
  1 材料与方法  44-46
    1.1 供试菌株  44
    1.2 试剂与仪器  44
    1.4 方法  44-46
  2 结果与分析  46-54
    2.1 尖孢镰刀菌ISSR-PCR扩增结果分析  46-48
    2.2 种群间遗传多样性分析  48-49
    2.3 种群间遗传变异分析  49-51
    2.4 个体聚类分析  51-53
    2.5 主成分分析  53-54
  3 讨论  54-56
第五章结论  56-57
参考文献  57-62
致谢  62-63
在读期间发表论文  63

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