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β-脱卤酶的克隆表达及应用

作　者: 常晓婷
导　师: 杨立荣
学　校: 浙江大学
专　业: 生物化工
关键词: 芽孢杆菌 β-脱卤酶 基因组文库 3-氯丙酸 3-羟基丙酸
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 39次
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内容摘要


3-羟基丙酸是当今世界12种最具潜力的平台化学产品之一。通过前期的工作,本实验室从土壤中筛选得到了一株能够产生p-脱卤酶的菌株芽孢杆菌Bacillus sp. CGMCC No.4196该菌株能够以3-氯丙酸为底物,代谢生成3-羟基丙酸。本文构建了Bacillus sp的基因组文库,通过功能筛选得到了序列长度为465bp的β-脱卤酶基因bhd,并以pET30a(+)为载体,Escherichia coli BL21(DE3)-CondonPlus为宿主,实现了基因的表达。通过镍离子亲和纯化得到重组β-脱卤酶rBhd,大小约为23.1kDa。酶学性质研究表明,以3-氯丙酸为底物,rBhd的最适温度为30℃,最适pH为7.0,Km和Vmax分别为3.26μmol/L和17.86μmol/(mL·min)。利用rBhd建立了以3-氯丙酸为底物,水解制备3-羟基丙酸的酶法转化路线。用rBhd制备3-羟基丙酸反应条件温和,且由于酶的专一性,使得底物转化率较高,无副产物生成。以10 mmol/L3-氯丙酸为底物,反应32h,底物转化率约为93%,产物3-羟基丙酸的终浓度约为9.4 mmol/L。本实验为酶法制备3-羟基丙酸奠定了基础。

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中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 基因工程（遗传工程）
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