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耐高渗酒精酵母的筛选

作　者: 贺东海
导　师: 王瑞明
学　校: 山东轻工业学院
专　业: 轻工技术与工程
关键词: 耐高渗酵母梯度渗透压筛选
分类号: TS261.11
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

在全球环境恶化、温室效应加剧、能源危机日益严峻的背景下,酒精作为一种可循环利用的绿色能源,正逐渐成为能源发展的战略方向。目前其生产方法以酵母发酵为主，优良性能酒精酵母的筛选在工业生产上具有重要的意义。耐高渗酵母是一类能在高渗透压环境繁殖、发酵的真核微生物。耐高渗酵母的耐渗特性适用于浓醪发酵，解决发酵过程中的各种问题。在高渗环境中酵母培养条件的改变会生产甘油和赤藓糖醇。其在化工、食品、医药、发酵等多方面有广泛的应用和前景，深入的研究和开发耐高渗酵母具有重要的意义。本文建立了用梯度渗透压驯化筛选样品中酵母菌的方法，从土壤、水果、糖蜜等环境中筛选出两株极耐高渗酵母，编号为F-3、F-5。并通过生理生化实验对其进行了形态、发酵特性鉴定和分子生物学鉴定。同时，进行了酿酒酵母的耐酒精实验及发酵性能对比试验，以验证所筛选耐高渗酵母的性能。实验采用了14%氯化钠渗透压直接筛选和梯度渗透压驯化筛选方法，结果表明，在过高的渗透压下，梯度渗透压驯化筛选方法对酵母筛选更有用。主要鉴定结果为：酵母菌株能在14%氯化钠渗透压环境生长、发酵。生长最适条件是pH6和30℃。分子生物学鉴定比对结果与假丝酵母同源性很高。

全文目录

摘要  9-10
ABSTRACT  10-11
第1章绪论  11-25
  1.1 酒精的性质和用途  11-14
    1.1.1 酒精的理化性质  11
    1.1.2 酒精的用途  11-12
    1.1.3 酒精作为燃料添加物的前景  12-14
      1.1.3.1 国际上酒精燃料发展现状及前景  12-13
      1.1.3.2 国内酒精燃料发展现状及前景  13-14
  1.2 酒精的生产工艺  14-16
    1.2.1 传统的生产工艺  14-15
    1.2.2 现代的新工艺  15-16
    1.2.3 现代新工艺对酒精酵母菌株的要求  16
  1.3 酵母菌研究概况  16-19
    1.3.1 酵母菌概述  16-17
    1.3.2 酵母菌的分类  17-18
      1.3.2.1 形态学分类  17-18
      1.3.2.2 生理学特征  18
      1.3.2.3 分子生物学特征  18
    1.3.3 培养基快速分类方法  18-19
  1.4 产酒精酵母的培养技术  19-21
    1.4.1 常用的产酒精酵母  19
    1.4.2 酵母菌生长的影响因素  19-21
      1.4.2.1 温度  19-20
      1.4.2.2 pH  20
      1.4.2.3 溶解氧  20
      1.4.2.4 渗透压  20
      1.4.2.5 水分  20-21
  1.5 耐高渗酿酒酵母  21-22
    1.5.1 耐高渗酿酒酵母的研究进展  21-22
    1.5.2 耐高渗酵母菌的应用前景  22
  1.6 实验路线及目标  22-25
    1.6.1 实验的技术路线  22-23
    1.6.2 实验的既定目标  23-25
第2章材料与方法  25-33
  2.1 材料  25-26
    2.1.1 酵母菌的分离源  25
    2.1.2 培养基  25
    2.1.3 主要试剂及来源  25-26
    2.1.4 主要仪器设备  26
  2.2 筛选方法  26-28
    2.2.1 酵母菌的分离  26-27
    2.2.2 耐高渗酵母菌的筛选  27-28
      2.2.2.1 耐高渗酵母菌的初筛  27
      2.2.2.2 耐高渗酵母菌的初筛  27-28
        2.2.2.2.1 紫外线诱变方法  27
        2.2.2.2.2 硫酸二乙酯(DES)诱变方法  27
        2.2.2.2.3 DES 紫外线复合诱变方法  27-28
      2.2.2.3 耐高渗酵母菌的复筛  28
      2.2.2.4 WL 琼脂培养基筛选酿酒酵母  28
  2.3 酿酒酵母的鉴定  28-31
    2.3.1 形态与培养特征  28
    2.3.2 26SrDNA D1/D2 区序列分析  28-31
      2.3.2.1 目的基因 PCR 的 DNA 制备  29
      2.3.2.2 26SrDNA D1/D2 区的 PCR 扩增  29-30
      2.3.2.3 目的基因连接和转化  30
      2.3.2.4 转化子质粒检验  30-31
    2.3.3 序列测定  31
    2.3.4 序列分析  31
  2.4 温度、pH 对酿酒酵母发酵的影响  31
    2.4.1 温度的影响  31
    2.4.2 pH 的影响  31
  2.5 酿酒酵母菌株在高渗培养基上的生长曲线  31
  2.6 耐酒精试验  31
  2.7 发酵性能试验  31-33
    2.7.1 发酵性能试验  31
    2.7.2 酒精浓度测定方法  31-33
第3章结果与分析  33-45
  3.1 耐高渗酵母的筛选  33-34
    3.1.1 耐高渗酵母菌的初筛  33
    3.1.2 耐高渗酵母菌的复筛  33
    3.1.3 酿酒酵母的 WL 琼脂培养基筛选  33
    3.1.4 筛选方法的比较  33-34
  3.2 酿酒酵母的鉴定  34-36
    3.2.1 菌落形态比较  34-35
    3.2.2 显微镜下的细胞形态比较  35-36
  3.3 26SrDNA D4/D2区序列分析  36-39
  3.4 温度、pH 对酿酒酵母发酵的影响  39-40
    3.4.1 温度的影响  39
    3.4.2 pH 的影响  39-40
  3.5 菌株在高渗培养基上的生长曲线  40-42
    3.5.1 F-3 的生长曲线  40-41
    3.5.2 F-5 的生长曲线  41-42
  3.6 耐酒精试验比较  42
  3.7 发酵性能比较  42-45
第4章结论与展望  45-46
  4.1 结论  45
  4.2 展望  45-46
参考文献  46-49
致谢  49-50
在学期间主要科研成果  50

耐高渗酒精酵母的筛选

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